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新霉素快速檢測(cè)試劑盒
新霉素快速檢測(cè)試劑盒
更新時(shí)間:2019-08-27
型    號(hào):
所屬分類:(組織﹑尿樣﹑血清)檢測(cè)
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公司大部分產(chǎn)品現(xiàn)貨供應(yīng)下單后較快可次日發(fā)貨(節(jié)假日除外),少數(shù)部分產(chǎn)品2-3天發(fā)貨。

新霉素快速檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品概述:

    公司的獸藥殘留快速檢測(cè)試劑盒(例:克倫特羅檢測(cè)試劑盒、氯霉素檢測(cè)試劑盒、硝基呋喃類檢測(cè)試劑盒)、動(dòng)物疾病診斷試劑(例:豬弓形蟲抗體檢測(cè)試劑盒、豬藍(lán)耳病檢測(cè)試劑盒、豬瘟病毒檢測(cè)試劑盒)、分子生物學(xué)工具酶、綠色水產(chǎn)藥品等一系列的產(chǎn)品已在國(guó)家機(jī)關(guān)、企業(yè)、科研單位廣為應(yīng)用。

 

畜禽(組織﹑尿樣﹑血清)檢測(cè)產(chǎn)品:

 

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新霉素

快速檢測(cè)試劑盒說明書

 

一、原理

本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物新霉素將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗新霉素抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物新霉素的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物新霉素的含量。

二、試劑盒特性

  • 試劑盒靈敏度:   0.1ppb
  • 孵育溫度:       25
  • 孵育時(shí)間:       30min15min
  • 樣本檢測(cè)下限

肌肉組織                                4ppb

                                    4ppb

牛奶、奶粉                              4ppb

  • 交叉反應(yīng)率

新霉素                                 100%

鏈霉素                               ﹤0.1%

慶大霉素                             ﹤0.1%

雙氫鏈霉素                           ﹤0.1%

卡那霉素                             ﹤0.1%

妥布霉素                            ﹤0.1%

紫蘇霉素                            ﹤0.1%

  • 樣本回收率

肌肉組織                            90±30%

雞肝、豬肝                          70±17%

牛奶、奶粉                          90±30%

蜂蜜                                90±30%

 

三、試劑盒組成

1

微量測(cè)試孔

每條8孔,一板12條

2

標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶

(1ml/瓶)

0ppb

0.1ppb

0.3ppb

0.9ppb

2.7ppb

8.1ppb

3

酶標(biāo)記物

7ml

紅色帽

4

抗體工作液

7ml

藍(lán)色帽

5

底物A液

7ml

白色帽

6

底物B液

7ml

黑色帽

7

終止液

7ml

黃色帽

8

20X濃縮洗滌液

40ml

白色帽

9

2X濃縮復(fù)溶液

50ml

透明帽

四、所用儀器、試劑

具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)、恒溫箱

微量移液器:?jiǎn)蔚?nbsp;20~200µl、單道100~1000µl、多道 30~300 µl

      劑:氫氧化鈉三氯乙suan

五、樣本前處理步驟

  • 樣本處理前須知

(a)實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。

(b)實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

  • 樣本前處理需配制:

配液1  3%三氯乙suan溶液:

稱取3 g三氯乙suan加去離子水100ml溶解。

配液2  2%三氯乙suan溶液:

稱取2 g三氯乙suan加去離子水100ml溶解。

配液3  2M NaOH溶液:

稱8g NaOH加去離子水定容至100ml。

配液4  樣本復(fù)溶液:

將2X濃縮復(fù)溶液用去離子水按1:1稀釋。

  • 樣本處理:

a)組織(雞肉/肝、豬肉/肝、蝦、魚)處理方法

  • 稱取2 g±0.05 g均質(zhì)后的組織樣本于50ml離心管中,加入8ml 3%三氯乙suan,振蕩5min,室溫4000r/min以上離心10min;
  • 取出2ml上清液于另一試管中,用2M NaOH調(diào)pH值至7.0~7.5之間(大約加入100µl)。取調(diào)pH值后的液體用樣本復(fù)溶液1:4(100µl+400µl樣本復(fù)溶液)稀釋,混合30s;
  • 取50 µl用于分析

樣本稀釋倍數(shù):  20 

b)蜂蜜、奶粉、牛奶處理方法

  • 稱取2 g±0.05 g(牛奶取2ml)樣本于50ml離心管中,加入8ml 2%三氯乙suan,振蕩5min,室溫4000r/min以上,離心10min;
  • 取出2ml上清液于另一試管中,用2M NaOH調(diào)pH值至8.0左右(大約加入100µl)。取調(diào)pH值后的液體用樣本復(fù)溶液1:4(100µl+400µl樣本復(fù)溶液)稀釋,混合30s;
  • 取50µl用于分析

樣本稀釋倍數(shù):  20 

六、 酶標(biāo)免疫分析程序:

  • 測(cè)定前應(yīng)須知:
  • 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(20~25)。
  • 使用之后立即將所有試劑放回2~8
  • 在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的*性,正確的洗板操作是ELISA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。
  • 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。
  • 操作步驟:
  • 從2~8冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(20~25)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
  • 取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于2-8
  • 配液:將40ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照1:19稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按所需用量配制洗滌液
  • 編號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
  • 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品50µl/孔到各自的微孔中,加入酶標(biāo)記物50µl/孔,然后再加入抗體工作液50µl/孔,用蓋板膜封板,25環(huán)境中反應(yīng)30min
  • 將孔內(nèi)液體甩干,用已稀釋的洗滌液250µl/孔洗板4~5次,每次間隔15~30秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
  • 顯色:加入底物A液50µl/孔,再加入底物B液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25環(huán)境中避光顯色15min
  • 測(cè)定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè),5min內(nèi)讀數(shù)),測(cè)定每孔OD值。

七、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含新霉素量成負(fù)相關(guān)。

1、粗略判定:

用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb為2.243; 0.1ppb為1.816;0.3ppb為1.415;0.9ppb為0.74;2.7ppb為0.313;8.1ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb~8.1ppb;樣本2的濃度范圍是0.3ppb~0.9ppb,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中新霉素實(shí)際濃度。

2、定量分析

(1)百分吸光率的計(jì)算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即

百分吸光(%)=

B

×100%

B0

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以新霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃(ng/ml)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中新霉素實(shí)際濃度。

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。

八、 注意事項(xiàng)

  • 室溫低于25或試劑及標(biāo)本未回到室溫(20~25)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
  • 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
  • 混合要均勻,否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
  • 反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
  • 不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。
  • 不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對(duì)光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
  • 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品1的吸光度值小于0.5時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。
  • 該試劑盒zui佳反應(yīng)溫度為25,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

九、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期

  • 儲(chǔ)藏條件:試劑盒于2~8保存,不要冷凍。
  •  質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請(qǐng)放心使用。

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