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PCR 產(chǎn)物純化回收試劑盒
PCR 產(chǎn)物純化回收試劑盒
更新時間:2018-12-25
型    號:
所屬分類:常用試劑
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1. 離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進口特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復性好。克服了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。

PCR 產(chǎn)物純化回收試劑盒產(chǎn)品概述:

PCR 產(chǎn)物純化回收試劑盒

quick Midi Purification Kit

 

保存條件:本試劑盒在室溫儲存 12 個月不影響使用效果。產(chǎn)品介紹:

在高離序鹽存在的情況下,DNA 片斷選擇性的吸附于離心柱內(nèi)的硅基質(zhì)膜上,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將引物、核苷酸、蛋白、酶等雜質(zhì)去除,最后低鹽、高 pH 值的洗脫緩沖液將純凈 DNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。

產(chǎn)品特點:

1. 離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進口特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復性好。克服了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。

2. 使用了優(yōu)質(zhì)結(jié)合液,不含傳統(tǒng)結(jié)合液的碘化那鈉和高氯酸鹽,不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。

3. 結(jié)合液調(diào)制成為了黃顏色,便于監(jiān)測 pH 值變化從而達到較理想結(jié)合效果,大大提高回收效率。

4. 簡單快速、使用方便。

注意事項:

1. 所有的溶液應(yīng)該是澄清的,如果環(huán)境溫度低時溶液可能形成沉淀,此時不應(yīng)該直接使用,可在 37℃水浴加熱幾分鐘,即可恢復澄清,使用前應(yīng)該恢復到室溫.

2. 儲存于低溫(4℃或者-20℃)會造成溶液沉淀,影響使用效果。

3. 避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH 值變化,各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子。

4. 結(jié)合液中含有刺激性化合物,操作時要戴乳膠手套,避免沾染皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時,要立即用大量清水或者生理鹽水沖洗。

5. 回收純化的 DNA 片段一般在 100bp 40kb 之間,過長、過短片段的回收效率迅速降低。

6. 回收 DNA 的量和起始 DNA 的量,洗脫體積,DNA 片斷大小有關(guān)。一般 1-20μg100bp-5kb DNA 片段,回收率可達 95%

7. pH ≤7.5 時,吸附膜吸附 DNA 的效率最高。如果待純化產(chǎn)物含有堿性物質(zhì)過多,造成和結(jié)合液混和后pH 偏高,會導致回收率降低。混和后,如果結(jié)合液依舊保持黃色,說明 pH 正常;如果變成橘紅色或者淡紫色,說明 pH 偏高,可加 5-10μl 3M 醋酸鈉pH5.2pH 值調(diào)到 5-7(黃色

  • 洗脫液 EB 不含有螯合劑 EDTA, 不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫, 但應(yīng)該確保 pH 大于 7.5pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫,DNA 片段應(yīng)該保存在-20℃。DNA 片段如果需要長期保存,可以用 TE 緩沖液洗脫10mM Tris-HCl1mM EDTApH 8.0,但是 EDTA 可能影響下游酶切反應(yīng),使用時可以適當稀釋。
  • 自備試劑:無水乙醇
  • 操作步驟:

提示:*次使用前請先在漂洗液 WB 中加入量無水乙醇,加入后請及時打鉤標記已加入乙醇,以免多次加入!

1. 100μl PCR 擴增后體系或者酶切后體系加入 500μl 結(jié)合液 BB,充分混勻。如果初始體系小于 100μl,請事先用雙蒸水調(diào)整至100μl

2. 將上一步所得溶液加入吸附柱 EC 中(吸附柱放入收集管中,室溫放置 1min12,000rpm 離心 30-60sec,倒掉收集管中的廢液。

3. 加入 500μl 漂洗液 WB(請先檢查是否已加入無水乙醇!12,000rpm  離心 30sec,棄掉廢液。

4. 重復操作步驟 3

 

5. 將吸附柱 EC 放回空收集管中,12,000rpm 離心 2min,盡量除去漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。

6. 取出吸附柱 EC,放入一個干凈的離心管中,室溫放置數(shù)分鐘。

7. 在吸附膜的中間部位滴加洗脫緩沖液 EB洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中加熱效果更好,室溫放置 2min12,000rpm  離心1min。如果需要較多量 DNA,可將得到的溶液重新加入吸附柱中,離心 1min(注意:洗脫體積越大,洗脫效率越高。如果需要

DNA 濃度較高,可以適當減少洗脫體積, 但是最小體積不應(yīng)少于 30μl,體積過小降 DNA 洗脫效率,減少產(chǎn)量。)

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