| 更新時(shí)間： | 2020-03-13 |
| 型 號(hào)： | |
| 所屬分類： | 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn) |
| 報(bào) 價(jià)： | 3000 |
提供商: 上海研謹(jǐn)生物服務(wù)名稱: 真核表達(dá)載體構(gòu)建實(shí)驗(yàn)服務(wù)規(guī)格: 實(shí)驗(yàn)服務(wù) 價(jià)格： 3000元收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:歡迎咨詢?cè)斦劊覀儠?huì)根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。更多實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)請(qǐng)瀏覽網(wǎng)站其他內(nèi)容,或來(lái)電詳詢!
真核表達(dá)載體構(gòu)建實(shí)驗(yàn)服務(wù)
一.服務(wù)介紹
分子克隆是在分子水平上提供一種純化和擴(kuò) 增特定DNA片段的方法。常含有目的基因,用體外重組方法將它們插入克隆載體，形成重組克隆載體,通過(guò)轉(zhuǎn)化與轉(zhuǎn)導(dǎo)的方式，引入適合的寄主體內(nèi)得到復(fù)制與擴(kuò)增，然后再?gòu)暮Y選的寄主細(xì)胞內(nèi)分離提純所需的克隆載體，可以得到插入DNA的許多拷貝，從而獲得目的基因的擴(kuò)增。
二、實(shí)驗(yàn)原理
外源DNA與載體分子的連接就是DNA重組，這樣重新組合的DNA叫做重組體或重組子。重組的DNA分子是在DNA連接酶的作用下,有Mg2+、ATP存在的連接緩沖系統(tǒng)中，將分別經(jīng)酶切的載體分子與外源DNA分子進(jìn)行連接。DNA連接酶有兩種: T4噬菌體DNA連接酶和大腸桿菌DNA連接酶。兩種DNA連接酶都有將兩個(gè)帶有相同粘性末端的DNA分子連在--起的功能， 而且T4噬菌體DNA連接酶還有一種大腸桿菌連接酶沒(méi)有的特性，即能使兩個(gè)平末端的雙鏈DNA分子連接起來(lái)。但這種連接的效率比粘性末端的連接效率低，一般可通過(guò)提高T4噬菌體DNA連接酶濃度或增加DNA濃度來(lái)提高平末端的連接效率。T4噬菌體DNA連接酶催化DNA連接反應(yīng)分為3步:首先，T4DNA連接酶與輔助因子ATP形成酶- AMP復(fù)合物;然后,酶一AMP復(fù)臺(tái)物再結(jié)合到具有5磷酸基和3羥基切口的DNA上，使DNA腺苷化;后產(chǎn)生一個(gè)新的磷酸二酯鍵， 把切口封起來(lái)。
DNA重組的方法主要有粘端連接法和平端連接法，為了防止載體本身的自連，可以通過(guò)(牛小腸堿性磷酸酶)CIP處理克服。
連接反應(yīng)的溫度在37°C時(shí)有利于連接酶的活性但是在這個(gè)溫度下，粘性末端的氫鍵結(jié)合是不穩(wěn)定的。因此人們找到了一個(gè)折中溫度，即12-16°C， 連接12-16h(過(guò)夜), 這樣既可大限度地發(fā)揮連接酶的活性，又兼顧到短暫配對(duì)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。
三、實(shí)驗(yàn)流程
1.目的DNA的擴(kuò)增和純化;
2.連接反應(yīng);
3.電泳檢測(cè)連接產(chǎn)物。
四、客戶提供
樣本DNA，基因序列,試劑盒。
五、公司提供
構(gòu)建好的載體，電泳膠圖，測(cè)序結(jié)果。
其他實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)
ELISA試劑盒免費(fèi)代測(cè) | Western Blot
| 基因組DNA提取
| 蛋白相互作用分析 |
免疫組化 | CCK8檢測(cè) | 熒光定量PCR | 動(dòng)物模型服務(wù) |
流式細(xì)胞檢測(cè) | 細(xì)胞增殖 | 激光共聚焦 | DNA甲基化實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞劃痕 | 鈣離子濃度檢測(cè) | 掃描電鏡實(shí)驗(yàn) | microRNA 測(cè)序 |
動(dòng)物實(shí)驗(yàn) | Taqman探針 | ATP/ADP檢測(cè)
| 石蠟/冰凍切片 |
定點(diǎn)突變 | 線粒體膜電位(MMP)檢測(cè) | 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定 | 藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
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免疫共沉淀 | 真核表達(dá)載體構(gòu)建 | 染色質(zhì)免疫沉淀CHIP | 非標(biāo)定量（Label-free）實(shí)驗(yàn) |
業(yè)執(zhí)照.jpg)
