ELISAS實(shí)驗(yàn)血清的制備
(2)抗血清的制備
① 所需的抗原量 一般1-10mg/mL。
②免疫途徑 抗原的注射方法有皮下注射、肌肉注射、腹膜內(nèi)注射、靜脈注射和淋巴結(jié)注射等。其中以靜脈注射zui為簡(jiǎn)單方便,不需要佐劑乳化,產(chǎn)生抗體的高峰值出現(xiàn)較早,一般在一周左右,注射后一周即可采血測(cè)試效價(jià)。免疫過(guò)程中應(yīng)注意:a.佐劑只能現(xiàn)配現(xiàn)用:b.采血時(shí)間不宜拖得太長(zhǎng)。因?yàn)槊庖邥r(shí)間越長(zhǎng),產(chǎn)生交叉反應(yīng)的抗體也越多。
③抗血清的分離 當(dāng)?shù)玫綕M意的效價(jià)時(shí),即可進(jìn)行取血。將收集到的血液成斜面放置在37℃、溫箱中2h。然后置于4℃冰箱過(guò)一夜。次日用滴管吸取抗血清,用離心法(2000-3000r/min,20min)去掉沉淀。然后測(cè)定效價(jià)、鑒定純度。純度用紫外分光光度計(jì)或Folin氏比色法進(jìn)行測(cè)定。抗血清保存于-25℃低溫處。
④抗血清的效價(jià)測(cè)定 測(cè)定的方法一般有兩種,即試管沉淀法和免疫雙擴(kuò)散法。對(duì)于免疫酶技術(shù)使用的抗血清,必須具有一定的效價(jià),試管沉淀法應(yīng)不低于1:2,免疫雙擴(kuò)散法不低于1:2,且要求單價(jià)抗血清。
(3)捕食者的收集和準(zhǔn)備 主要方法有3個(gè):①將胃內(nèi)含物擠在質(zhì)量好的濾紙上,但蛋白質(zhì)易與纖維素結(jié)合,若保存過(guò)久則難以洗脫:②將待檢查的捕食封閉在明膠膠囊內(nèi),并加干燥劑,以使蟲體與膠囊分離:③盡可能快地將采集到的捕食者儲(chǔ)存于低溫下(如-40℃)。前兩種方法適于郵寄和長(zhǎng)途運(yùn)輸,后一種方法能保存較長(zhǎng)的時(shí)間。所有的方法都需保持干燥。對(duì)較大的捕食者,可將消化道分離,像蟻、蝸牛以及蜘蛛等小型動(dòng)物則整個(gè)蟲體。(4)酶聯(lián)抗體的制備 按戊二醛簡(jiǎn)易法進(jìn)行。
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