美國程序降溫盒采用聚碳酸脂(PC)盒體,藍色高密度聚乙烯(HDPE)蓋,白色高密度聚乙烯(HDPE)管槽,泡沫襯墊。
可實現(xiàn)每分鐘1℃降溫,大大提高凍存細胞的存活率,從冰箱拿出來后,泡沫內(nèi)襯及異丙醇也可保證逐步升溫,故也可用于細胞復蘇。
用之前在盒夾層內(nèi)注入100%濃度的異丙醇,管槽可放置1-2ml凍存管或儲液管18個,同時管槽支架可防止管子與酒精接觸,以防由于毛細作用而造成污染,或弄掉標簽。
美國程序降溫盒的使用注意事項如下:
經(jīng)驗1:美國程序降溫盒外表面有刻度的吧,異丙醇液面要高于底線。
美國程序降溫盒肯定是先放在室溫,然后放進去細胞,置于-80,利用異丙醇實現(xiàn)梯度降溫啊。
根據(jù)論壇里的討論,異丙醇使用過一段時間后是要更換的,但是我一直沒換過,也沒發(fā)現(xiàn)很大問題。
經(jīng)驗2:我們實驗室美國程序降溫盒平時放4度,需要凍細胞時直接拿出來用就可以了。第二天轉(zhuǎn)移至液氮,貴重的細胞盡快轉(zhuǎn)移,不然會影響復蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇。現(xiàn)在也有一些商品化凍存液可以直接丟進-80的,很方便,效果也不錯的。
經(jīng)驗3:異丙醇的量是要保證的,不能低于表明的線,否則不能起到很好的程序性降溫作用,我們是在4度放置,放了細胞后立馬放到-80度冰箱,第二天再轉(zhuǎn)移到液氮,效果很不錯。異丙醇熔點:-87.9度的色透明具有乙醇氣味的可燃性有毒液體。注意了有可燃性!急性毒性:口服-大鼠LD50:5840毫克/公斤;口服-小鼠LC50:3600毫克/公斤。刺激數(shù)據(jù):眼睛-兔子100毫克/!請注意清理!
經(jīng)驗4:應該不可以把美國程序降溫盒放4°的,因為梯度降溫的起始點是室溫20°左右,所以從-80℃拿出來的美國程序降溫盒應該現(xiàn)在室溫靜置一段時間待其恢復到室溫再使用。而其中的異丙醇應使用6~7此后更換一次,而且保證液體量達到刻度線,否則降溫效果會受到影響。
經(jīng)驗5:美國程序降溫盒里的異丙醇一般是250ml,低于刻度了要加上,理論上是5次以后更換異丙醇,但是異丙醇對環(huán)境有害,我們可以多用幾次,只是少了的時候要加滿。還有凍存液里面的DMSO對細胞有毒性,尤其是室溫的時候,所以美國程序降溫盒和凍存液先放4°,等把細胞用凍存液重懸好了放在美國程序降溫盒里,還放回4°,等到出細胞間的時候再拿到-80°里面保存。過夜再轉(zhuǎn)入液氮。