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土壤堿性磷酸酶 (S-AKP/ALP) 活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

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土壤堿性磷酸酶 (S-AKP/ALP) 活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

意:正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

規(guī)格:100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容:

試劑一:液體 42mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑:粉劑×1 瓶,4℃保存。用前加 100mL 蒸餾水充分溶解。

三:液體 2.5mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:粉劑×1 支,4℃避光保存。臨用前加 576µL 無(wú)水乙醇 (自備) ,24µL 蒸餾水充分溶解。 (變褐色后不能再使用)

標(biāo)準(zhǔn)品:液體 1mL×1 支,0.5 µmol/mL 苯酚標(biāo)準(zhǔn)液,4℃保存。

產(chǎn)品說(shuō)明:

壤磷酸酶是一類(lèi)催化土壤有機(jī)磷礦化的酶,其活性的高低直接影響著土壤中有機(jī)磷的分解轉(zhuǎn) 化及其生物有效性,是評(píng)價(jià)土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強(qiáng)度的指標(biāo)。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有 磷含量和 pH 顯著影響,根據(jù)最適 pH 范圍,通常分為酸性、中性和堿性三種類(lèi)型。

性環(huán)境中,S-AKP/ALP 催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉,通過(guò)測(cè)定酚的生成量即 計(jì)算出 S-AKP/ALP 活性。

驗(yàn)中所需的儀器和試劑:

分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量比色皿/96 孔板、臺(tái)式離心機(jī)、37℃恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式 器、冰、蒸餾水、乙醇和甲苯。

作步驟:

一、粗酶液提?。?/span>

稱取風(fēng)干混勻土壤約 0. 1g ,加入 0.05mL 甲苯 (自備) ,輕搖 15min ;加 0.4 mL 試劑一并且搖 勻后,置于 37℃恒溫培養(yǎng)箱,開(kāi)始計(jì)時(shí),催化反應(yīng) 24h;到時(shí)后迅速加入 1mL 試劑二充分混勻,以 酶催化的反應(yīng)。10000rpm 室溫離心 10min ,取上清液置于冰上待測(cè)。

、測(cè)定步驟:

(1)  分光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 660 nm ,蒸餾水調(diào)零。

(2)  空白管:取微量比色皿/酶標(biāo)板,加入 10 µL 試劑一,20 µL 試劑三,4 µL 試劑四,充分混  勻,顯色后再加蒸餾水 166µL ,混勻后室溫靜置 30 min ,于 660 nm 測(cè)定吸光度,記為 空白管。

(3)  標(biāo)準(zhǔn)管:取微量比色皿/酶標(biāo)板,加入 10 µL 標(biāo)準(zhǔn)液,20 µL 試劑三,4 µL 試劑四,充分混  勻,顯色后再加蒸餾水 166µL ,混勻后室溫靜置 30 min ,于 660 nm 測(cè)定吸光度,記為 標(biāo)準(zhǔn)管。

(4)  測(cè)定管:取微量比色皿/酶標(biāo)板,加入 10 µL 上清液,20 µL 試劑三,4 µL 試劑四,充分混  勻,顯色后再加蒸餾水 166µL ,混勻后室溫靜置 30 min 于 660 nm 測(cè)定吸光度,記為 測(cè)定管。 注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要測(cè)定一次。


S-AKP/ALP 活性計(jì)算:

活性單位定義:37℃中每克土壤每天釋放 1nmol 酚為 個(gè)酶活單位。

S-AKP/ALP  nmol/d/g =[C 標(biāo)準(zhǔn)液 ×(A 測(cè)定管- A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管- A 空白管)]×V 

÷W÷T×1000

=725×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管W

C 標(biāo)準(zhǔn)液:0.5 µmol/mL;  V 總:催化體系總體積,1.45mLW:土壤樣品質(zhì)量,g;T :催化 應(yīng)時(shí)間,24 h=1 d;1000:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),mol=1000nmol。

:線性范圍為 0.03125µmol/mL-2.5µmol/mL

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