堿性磷酸酶(AKP/ALP)活性檢測試劑盒說明書 |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
文件下載   | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細介紹 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
堿性磷酸酶(AKP/ALP)活性檢測試劑盒說明書 注意:正式測定之前選擇預期差異大的樣本做預測定。提取液:液體 60mL×1 瓶,4℃保存。試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃避光保存。試劑二:液體 5mL×1 瓶,4℃避光保存。 試劑三:液體 15mL×1 瓶,4℃避光保存,變成藍綠色不能使用。 標準品:液體 1mL×1 支,2μmol/mL 酚標準液,4℃保存。 產品說明:AKP/ALP 是一種含鋅的糖蛋白酶,在堿性環境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。 AKP/ALP 廣泛分布于人體各臟器中,以肝臟為主。 在堿性環境中,AKP/ALP 催化磷酸苯二鈉生成游離酚;酚與 4-氨基安替比林和鐵氰HUA鉀反應紅色亞醌衍生物,在 510nm 有特征光吸收;通過測定 510 nm 吸光度增加速率,來計算 AKP 活性。試驗中所需的儀器和試劑: 可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰和蒸餾水。 操作步驟:一、粗酶液提取: 稱取約 0.1g 組織,加提取液 1mL 充分研磨,4℃、10000rpm 離心 10min,取上清液待測。血液可直接用于測定,或者適當稀釋后用于測定。 二、測定步驟:1. 分光光度計/酶標儀預熱 30 min 以上,調節波長到 510 nm,蒸餾水調零。 2. 試劑二置于 37℃水浴中預熱 30 min 以上。
www.yanjinbio.com 上海研謹生物科技有限公司 郵箱:yanjinbio@163.com 服務熱線:400-665-0203 本產品僅供科學研究使用!請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途! 三、AKP/ALP 活性計算:1. 按蛋白濃度計算 活性單位定義:37℃中每毫克蛋白每分鐘催化產生 1 μmol 酚為一個酶活力單位。 AKP/ALP (U/mg prot)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 樣]÷(Cpr×V 樣)÷T =0.133×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管) ÷Cpr 2. 按樣本鮮重計算 活性單位定義:37℃中每克組織每分鐘催化產生 1 μmol 酚為一個酶活力單位。 AKP/ALP (U/g 鮮重)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 樣] ÷(W÷V 提取×V 樣)÷T=0.133×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)÷W 3. 按液體體積計算 活性單位定義:37℃中每毫升血液每分鐘催化產生 1μmol 酚為一個酶活力單位。 AKP/ALP (U/mL)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 樣] ÷V 樣÷T =0.133×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管) C 標準品:2μmol/mL;V 反總:反應體系總體積(mL),204μL=0.204mL; V 樣:加入反應體系中上清液體積(mL),0.004mL;T:反應時間(min),15 min;V 提取:加入提取液體積,1mL; W:樣本鮮重,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL。 注意事項:1、 試劑一、試劑二和試劑三均需避光保存。 2、 試劑三變藍綠色后不能再使用。 3、 加入試劑三后必須立即混勻,否則顯色不*。 從2011年開始我們致力于在生命科學領域、生物醫學實驗外包及論文潤色服務,協助客戶各類實驗服務及論文潤色,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴! 如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯系。
實驗代做服務:
|