馬鈴薯卷葉病毒5(PLRV5)ELISA試劑盒說明書 |
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詳細介紹 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
馬鈴薯卷葉病毒5(PLRV5)酶聯免疫分析(ELISA) 試劑盒使用說明書 本試劑僅供研究使用 目的:本試劑盒用于檢測植物組織,細胞上清及相關液體樣本中馬鈴薯卷葉病毒5(PLRV5)水平。 實驗原理: 本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫法(ELISA)測定標本中馬鈴薯卷葉病毒5(PLRV5)。用純化的馬鈴薯卷葉病毒5(PLRV5)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中馬鈴薯卷葉病毒5(PLRV5)相結合,經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的馬鈴薯卷葉病毒5(PLRV5)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中馬鈴薯卷葉病毒5(PLRV5)的存在與否。
試劑盒組成:
樣本處理及要求: 1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。 2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。 3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。 4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。 5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。 6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融. 7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟:
結果判定: 試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10 臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15 陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為馬鈴薯卷葉病毒5(PLRV5)陰性 陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為馬鈴薯卷葉病毒5(PLRV5)陽性 注意事項 1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。 2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。 3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
5.底物請避光保存。 6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm 7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。
保存條件及有效期 1.試劑盒保存:;2-8℃。 2.有效期:6個月 |