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人CD14分子(CDl4)ELISA試劑盒實驗原理
點擊次數:1643 更新時間:2010-09-19

CD14分子(CDl4)ELISA試劑盒實驗原理

 

                                                                                               

規格:原裝/96T ELISA試劑盒 分裝 48T/96T ELISA試劑盒

實驗原理:

案例分析:CD14分子(CDl4)ELISA

本試劑盒應用間接法測定標本中CD14分子(CDl4)ELISA水平。用純化的CD14分子(CDl4)ELISA抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被抗體的微孔中依次加入已知濃度的CD14分子(CDl4)ELISA標準品和未知濃度的CD14分子(CDl4)ELISA待檢樣品,溫育后,加入生物素標記的抗IgG抗體,再與鏈霉親和素-HRP結合,形成免疫復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的CD14分子(CDl4)ELISA呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中CD14分子(CDl4)ELISA濃度。

樣本處理及要求:

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。

2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000/分)去除顆粒。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20保存,但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

試劑盒組成:

1

20倍濃縮洗滌液

30ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標試劑

6ml×1

8

標準品(180 ng/L

0.5ml×1

3

酶標包被板

12孔×8

9

標準品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑A

6ml×1

11

封板膜

2 

6

顯色劑B

6ml×1/

12

密封袋

1

注意事項:

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔OD值的),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5. 嚴格按說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

6.本試劑不同批號組分不得混用。

7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.底物請避光保存。

安全性:
1 避免直接接觸終止液和底物。如不小心接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
2
 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3
 不要用嘴接觸試劑盒里的任何成份。

4   Elisa試劑盒請遠離兒童

自備物品:

1 、 37 ℃ 恒溫箱

2 、 標準規格酶標儀

3 、 精密移液器及一次性吸頭

4 、 蒸餾水

5 、 一次性試管

6 、 吸水紙

 

保存條件及有效期:

 

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6個月

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