SuperQuickRT cDNA*鏈合成試劑盒說明書
SuperQuickRT cDNA Kit
(For Real-time PCR)
SuperQuickRT cDNA*鏈合成試劑盒
(For Real-time PCR)
目錄號:YJ2381
保存條件:-20℃。
規格說明
Cat. No. YJ2381B YJ2381
Kit Size 25 100
SuperQuickRT Mix 12.5 μl 50 μl
5×RT Buffer(For Real-time PCR) 55 μl 220 μl
Primer Mix 27.5 μl 110 μl
dNTP Mix (2.5 mM Each) 55 μl 220 μl
RNase-Free Water 1 ml 1 ml
本產品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途
產品簡介
本產品是為Real-time RT-PCR研發的快速逆轉錄試劑,其包含從RNA模板逆轉錄
成cDNA*鏈所需的全部試劑,優化的反應體系為快速逆轉錄酶提供更可靠的反應條
件。SuperQuickRT逆轉酶逆轉錄效率高,可對少量RNA模板進行良好的逆轉錄反應,
15分鐘即可完成熒光定量 PCR模板cDNA*鏈合成。另外,逆轉錄反應溫度可以提
高到50 oC,可通讀GC含量高和二級結構復雜的RNA模板。
產品特點
1.快速:42 oC,15min可完成cDNA*鏈合成。
2.反轉錄效率高:反轉錄效率高于90%。
3.靈敏度高:pg級模板也可以得到高質量的cDNA。
4.通讀復雜模板:GC含量高和二級結構復雜模板。
注意事項
1.在操作過程中應避免RNase污染,防止RNA降解或實驗中的交叉污染,建議操作人
員帶口罩和一次性手套并經常更換手套,使用專門的儀器和耗材。
2.逆轉錄體系配制在冰上進行操作,防止RNA發生降解。試劑盒的酶使用后盡快置于
-20 oC保存,并盡量避免反復凍融。
3.Primer Mix是由Oligo(dT)和random primer配制而成,也可根據實驗需要選用Oligo-dT
Primer或Gene Specific Primer。
4.反應體系可倍比放大,10 μl反應體系可zui大使用1μg總RNA。
5.對于二級結構復雜的RNA模板,建議在操作步驟之前,將模板RNA在65℃孵育5min立刻置于冰上,短暫離心后進行下一步操作。
操作步驟
1.將模板RNA在冰上解凍;將試劑盒組分在室溫解凍后立刻置于冰上,使用前將每種
溶液渦旋振蕩混勻,并經短暫離心后使用。
2.根據以下表格配制反應體系,渦旋震蕩混勻,短暫離心,使管壁上的溶液收集到管底。
試劑 10 μl反應體系 終濃度
dNTP Mix (2.5 mM Each) 2 μl 500 μM Each
Primer Mix 1 μl
1)
RNA Template X μl 10 pg~1 μg2)
5×RT Buffer(for Real-time PCR) 2 μl 1×
SuperQuickRT Mix 0.5 μl
RNase-Free Water up to 10 μl
注意:1)根據實驗需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer,建議10 μl 反應體系加入Oligo-dT Primer 25 pmol,或Gene Specific Primer 2.5 pmol 。
2)如果總RNA量大于1 μg,請按比例擴大反應體系。
3.42℃孵育15分鐘。
注意:對于二級結構復雜或GC含量高的模板,可以提高逆轉錄溫度至50℃,增強逆轉錄效率。
4.85℃孵育5分鐘,使逆轉錄酶失活。
5.短暫離心后置于冰上,再進行后續Real-time PCR檢測,如果需要長時間保存,請
置于-20℃。
注意:進行Real-time PCR反應時,逆轉錄產物的加量應不超過PCR反應總體積的1/10。
相關產品信息
目錄號 產品名稱 產品特點
YJ0580 TRIzon總RNA提取試劑 適用范圍廣的RNA提取試劑
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YJ2381 僅需15分鐘,即可完成熒光定量PCR所需的cDNA
即用型逆轉錄mix,只需加入RNA和水
SuperQuickRT MasterMix
YJ2391 即可反應。僅需15分鐘,即可完成熒光 (for Real-Time PCR)
定量PCR所需的cDNA
熒光定量PCR—SYBR Green法
YJ0957 UltraSYBR Mixture
特異性強、靈敏度低、擴增效率高
熒光定量PCR—Taqman法
YJ0932 GoldStar Taqman Mixture
特異性強、靈敏度低、擴增效率高