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HiFi-MMLV cDNA*鏈合成試劑盒說明書
點(diǎn)擊次數(shù):2022 更新時(shí)間:2015-05-15

 

                      HiFi-MMLV cDNA*鏈合成試劑盒說明書

HiFi-MMLV cDNA Kit

目錄號:YJ0744

保存條件:-20℃保存。

組分說明

 

             Cat. No.                   YJ0744      YJ0744A

             Kit Size                      25          100

             HiFi-MMLV,200 U/μl          25 μl        100 μl

             5×RT Buffer                 120 μl       500 μl

             Primer Mix                  60 μl        240 μl

             dNTP Mix,2.5 mM Each        120 μl       500 μl

             DTT,0.1 M                   60 μl        240 μl

             RNase-Free Water             1 ml         1 ml

 

 

             本產(chǎn)品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途  

 

 

產(chǎn)品簡介

 

  本產(chǎn)品是專為兩步法RT-PCR*步實(shí)驗(yàn)配制的cDNA*鏈合成試劑盒。本產(chǎn)品包

含從RNA模板逆轉(zhuǎn)錄成cDNA*鏈所需的所有試劑,其中包括HiFi-MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶、

反應(yīng)緩沖液、引物、dNTP等。經(jīng)過突變改造的HiFi-MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶RNase H活性缺失,

減少了逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中RNA的降解,更容易獲得全長的cDNA。HiFi-MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶熱穩(wěn)

定性強(qiáng),可得高產(chǎn)量的 cDNA,使用簡單方便。本系統(tǒng)對后續(xù)的  PCR以及定量PCR試

驗(yàn)兼容性高,適用各種PCR反應(yīng)的DNA聚合酶。

 

產(chǎn)品特點(diǎn)

 

·RNase H-:經(jīng)突變的HiFi-MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶,RNase H活性缺失,更易獲得全長cDNA。

·使用方便:試劑盒包含除RNA模板外的逆轉(zhuǎn)錄所需全部試劑。

 

注意事項(xiàng)

 

1.在操作過程中應(yīng)避免RNase污染,防止RNA降解或?qū)嶒?yàn)中的交叉污染,建議在專門

   的區(qū)域進(jìn)行RNA操作,使用專門的儀器和耗材,操作人員帶口罩和一次性手套并經(jīng)

   常更換手套。

2.實(shí)驗(yàn)盡量使用一次性塑料器皿,若使用玻璃器皿,應(yīng)使用0.1%DEPC(焦碳酸二乙

   酯)水溶液在37℃處理12小時(shí),并在120℃下高壓滅菌30分鐘后使用,或者將玻璃

   器皿在180℃下干熱滅菌60分鐘后使用。實(shí)驗(yàn)中用到的無菌水應(yīng)使用 0.1%的DEPC

   處理后進(jìn)行高壓滅菌。

3.本試劑盒中的所有試劑使用前請上下顛倒輕輕混勻,盡量避免起泡,并經(jīng)短暫離心

   后使用。所涉及的酶類使用后應(yīng)盡快放回-20℃,避免反復(fù)凍融。

4.若起始RNA的量小于50  ng,建議加入RNA酶抑制劑(RNasin)。本試劑盒并未提

   供,如需要可單獨(dú)向本公司訂購,貨號:YJ0596。

 

 

使用方法

 

注意:10 ng-5 μg總RNA可建立20 μl反應(yīng)體系,如果總RNA量大于5 μg,請按比例擴(kuò)大反應(yīng)體系。

 i逆轉(zhuǎn)錄操作步驟:

1.將RNA模板、引物、dNTP Mix、DTT、RT Buffer、HiFi-MMLV和RNase-Free Water 

   溶解并置于冰上備用。

2.根據(jù)以下表格配制反應(yīng)體系,總體積為20 μl。

 

試劑                    20 μl反應(yīng)體系             終濃度

dNTP Mix,2.5 mM Each               4  μl         500 μM Each

Primer Mix                         2  μl

RNA Template                       X  μl           1 ng-5 μg

5×RT Buffer                        4  μl              1×

DTT,0.1 M                          2  μl            10 mM

HiFi-MMLV,200 U/μl                 1  μl

RNase-Free Water               up to 20  μl

 

    注意:1)若起始RNA的量小于50 ng,則建議加入RNA酶抑制劑(RNasin)。本試劑盒并未提供,如需要可單獨(dú)向本公司訂購,貨號:YJ0596。

    2)Primer Mix由Oligo(dT)和Random Primer配制而成。

3.渦旋震蕩混勻,短暫離心,使管壁上的溶液收集到管底。

4.42℃孵育30-50分鐘,85℃孵育5分鐘。反應(yīng)結(jié)束后,短暫離心,置于冰上冷卻。

5.逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可直接用于PCR反應(yīng)和熒光定量PCR反應(yīng),或置于-20℃長期保存。

ii  若逆轉(zhuǎn)錄效率低,或RNA模板二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜、GC含量高時(shí),建議采用以下步驟:

1.將RNA模板、引物、dNTP Mix、DTT、RT Buffer、HiFi-MMLV和RNase-Free Water 

   溶解并置于冰上備用。

2.根據(jù)以下表格配制反應(yīng)體系,總體積為13 μl。

 

試劑                        20 μl反應(yīng)體系             終濃度

dNTP Mix,2.5 mM Each               4  μl         500 μM Each

Primer Mix                         2  μl

RNA Template                       X  μl           1 ng-5 μg

RNase-Free Water               up to 13  μl

 

3.70℃孵育10分鐘,迅速冰浴2分鐘。

4.短暫離心,使管壁上的溶液收集到管底。

5.繼續(xù)向以上反應(yīng)液中加入以下試劑:

 

試劑               20 μl反應(yīng)體系          終濃度

5×RT Buffer           4 μl            1×

DTT,0.1 M             2 μl          10 mM

 

        注意:1)若起始RNA的量小于50 ng,則建議加入RNA酶抑制劑(RNasin)。本試劑盒并未提供,如需要可單獨(dú)向本公司訂購,貨號:YJ0596。

        2)Primer Mix由Oligo(dT)和Random primer配制而成。

6.輕輕吹打混勻,42℃孵育2分鐘。

7.加入1 μl HiFi-MMLV(200 U/μl),輕輕吸打混勻。42℃孵育50分鐘。

8.85℃孵育5分鐘。反應(yīng)結(jié)束后,短暫離心,置于冰上冷卻。

9.逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可直接用于PCR反應(yīng)和熒光定量PCR反應(yīng),或置于-20℃長期保存。

 

     相關(guān)產(chǎn)品信息

 

目錄號               產(chǎn)品名稱                              產(chǎn)品特點(diǎn)

YJ0580   TRIzon總RNA提取試劑                適用范圍廣的RNA提取試劑

YJ0581 超純RNA提取試劑盒   兼具有適用范圍廣和純度高特點(diǎn)的RNA提取試劑

YJ0597 超純RNA提取試劑盒(含DnaseI)靈敏度高,可識(shí)別pg級別的模板。與RNA親和力強(qiáng),

YJ0741   SuperRT cDNA*鏈合成試劑盒    能夠通讀GC含量高,二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板。

YJ0744   HiFi-MMLV cDNA*鏈合成試劑盒獲得cDNA產(chǎn)物

                SuperQuickRT  cDNA*鏈合成試逆轉(zhuǎn)錄(針對于熒光定量PCR)

YJ2381 劑盒(For Real-time PCR) 

                                                     僅需15分鐘,即可完成熒光定量PCR所需的cDNA 

                SuperQuickRT MasterMix               即用型逆轉(zhuǎn)錄mix,只需加入RNA和水即可反應(yīng)。僅

YJ2391     (for Real-Time PCR)     需15分鐘,即可完成熒光定量PCR所需的cDNA 

YJ0688   Es Taq DNA Polymerase 

                                            兼具高擴(kuò)增效率和高保真性的PCR產(chǎn)品

YJ0690   Es Taq MasterMix 

YJ0957   UltraSYBR Mixture                      熒光定量PCR—SYBR Green法

YJ0956   UltraSYBR Mixture(With ROX)            特異性強(qiáng)、Ct值低、定量更準(zhǔn)確

 

 

  

滬公網(wǎng)安備 31011802001678號

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