間充質干細胞成軟骨誘導分化試劑盒
,成軟骨誘導液
貨號：YJ-MSCYD-003
價格： 2880.0
規格： 200ml
產品描述
本產品為團隊精心優化的間充質干細胞成軟骨誘導分化試劑盒，可增強間充質干細胞向成軟骨細胞分化的能力。
本產品僅用于科研用途，不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。
產品組成成分及保存
試劑名稱 | 體積 | 保存條件 | 有效期 |
地塞米松 | 20μL | -20℃ | 1 Year |
脯氨酸 | 200μL | -20℃ | 1 Year |
抗壞血酸 | 600μL | -20℃ | 1 Year |
TGF-β1 | 2mL | -20℃ | 1 Year |
丙酮酸鈉 | 2mL | -20℃ | 1 Year |
ITS 添加物 | 2mL | -20℃ | 1 Year |
雙抗 | 2mL | -20℃ | 1 Year |
胎牛血清 | 20mL | -20℃ | 1 Year |
基礎培養基 | 200mL | 2-8℃ | 1 Year |
甲苯胺藍染色液 | 5mL | RT（室溫） | 1 Year |
注意：
1.為保證產品的有效性，請避免反復凍融。
2.現用現配，配制好的預混液保存于2-8℃，有效期1 month;配制好的完全培養基保存于2-8℃，有效期12 hours.
產品使用說明
1. 成軟骨誘導分化完全培養基的配制
①室溫條件下融化各因子及血清。各因子融化后，瞬時離心，使溶液集中于離心管底部。
（注意：若因子或血清中有沉淀物，屬正常現象，無須過濾，避免成分丟失。）
②根據實驗用量，于無菌操作臺中配制誘導分化完全培養基，建議每次配制50mL，配制比例見下表：
試劑成分 | 配制比例 | 50mL配制體系 |
地塞米松 | 0.01% | 5μL |
脯氨酸 | 0.1% | 50μL |
抗壞血酸 | 0.3% | 150μL |
TGF-β1 | 1% | 500μL |
丙酮酸鈉 | 1% | 500μL |
ITS 添加物 | 1% | 500μL |
雙抗 | 1% | 500μL |
胎牛血清 | 10% | 5mL |
基礎培養基 | 補充至所需體積 | 補充至總體積為50mL |
2. 成軟骨誘導分化實驗步驟
①建議取第3~5代、純度達90%以上、狀態良好的間充質干細胞，將其消化下來，離心收集，使用間充質干細胞完全培養基調整細胞密度為1~5×105個cell/mL，均勻鋪于6孔板中，每孔2mL，置于37℃恒溫細胞培養箱中培養。
（注意：此處細胞密度及培養液體積以6孔板為例，若為其它培養器皿，請根據實際情況調整細胞密度及培養液體積。）
②待細胞匯合度達80%~100%時，即可進行誘導分化。
③小心吸棄細胞培養上清，沿孔壁緩慢加入提前配制好的誘導分化完全培養基，每孔2mL，置于37℃恒溫細胞培養箱中培養。
（注意：完全培養基加入細胞前需提前置于37℃預熱。）
③每2day換用新鮮的誘導分化完全培養基。換液時，若細胞培養上清顏色變為澄清的黃色，是由于細胞量較大，培養基消耗較快導致的，請及時調整為每日換液。
（注意：完全培養基加入前需提前置于37℃預熱。）
④細胞誘導3周后，即可進行甲苯胺藍染色鑒定。
3. 甲苯胺藍染色分析
①細胞誘導分化結束后，小心吸棄細胞培養上清，1×PBS潤洗1~2次。每孔加入1mL細胞固定液（4%中性甲醛溶液等），室溫固定30 min。
②吸棄細胞固定液，1×PBS潤洗2次。沿孔壁緩慢加入甲苯胺藍染色液，每孔1mL，室溫染色30min。
（注意：染色液底部可能會有沉淀，吸取時盡量不要觸及底部。若染色后有沉淀，1×PBS洗去即可。）
③吸出染色液，1×PBS潤洗，去掉浮色。顯微鏡下觀察細胞染色效果，背景呈淡藍色，成軟骨細胞呈紫紅色。
（注意：染色液可重復使用，建議收集。）
質量控制
無菌檢測（細菌、真菌和支原體檢測）
pH測試
滲透壓檢測
內毒素
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注意事項
僅限科研用。
培養體系中的一些組分是對人體健康有害的物質，請不要用暴露的皮膚接觸培養體系的液體和有培養體系的液體殘留的容器內部；這部分有害物質的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。
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