布魯氏菌病抗體檢測試劑盒
使用說明書
（酶聯免疫法）
【產品名稱】
通用名：布魯氏菌病抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Brucella（ELISA）
【包裝規格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
【預期用途】
布魯氏菌病是由布魯氏菌（Brucella）引起的人、畜共患傳染病，其特征是生殖器官和胎膜炎，引起流產、不育和各種組織的局部病灶。
本試劑用于檢測牛、羊血清中布魯氏桿菌抗體，可用于布魯氏菌疫苗免疫效果評價或該病的輔助診斷。
【原 理】
本試劑盒由預包被布魯氏菌抗原的酶標板、酶標記物、抗體工作液及其他配套試劑組成，應用競爭酶聯免疫法（ELISA）原理檢測牛羊血清、血漿樣本中布魯氏菌抗體。實驗時在酶標板中加入待檢樣本及酶標記物、抗體工作液，經溫育后若樣品中含有布魯氏菌抗體，則將與抗體工作液競爭結合酶標板上抗原，酶標記物與抗體工作液及酶標板上抗原形成復合結合物；再經洗滌除去未結合的其他成分，在孔中加TMB底物液，若樣品中含有布魯氏菌抗體則將阻斷酶標記物、抗體工作液與酶標板上抗原結合，從而使后續反應不出現顯色；反之則出現顯色；顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負相關；加入終止
液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有布魯氏菌抗體。
【試劑盒組成】
名稱 | 規格 （96T×1） | 規格 （96T×2） | 規格 （96T×5） |
酶標板 | 96T×1 | 96T×2 | 96T×5 |
酶標記物(紅蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 | 26ml×1 |
抗體工作液（藍蓋） | 6ml×1 | 11ml×1 | 26ml×1 |
20X濃縮洗滌液（白蓋） | 40ml×1 | 40ml×1 | 200ml×1 |
底物液A(白蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 | 26ml×1 |
底物液B(黑蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 | 26ml×1 |
終止液(黃蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 | 26ml×1 |
陽性對照(紅蓋) | 1.0 ml×1 | 1.5 ml×1 | 2.0 ml×1 |
陰性對照（綠蓋) | 1.0 ml×1 | 1.5 ml×1 | 2.0 ml×1 |
蓋板膜 | 1張 | 2張 | 5張 |
自封袋 | 1個 | 1個 | 2個 |
說明書 | 1份 | 1份 | 1份 |
稀釋板 | 1份 | 2份 | 5份 |
【適用儀器】
含450nm、630nm波長的酶標儀，37℃恒溫設備，可調微量移液器。
【樣品準備】
1.取動物全血按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。
2. 濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作 20 倍稀釋成工作洗滌液 ( 如 19 份蒸餾水或去離子水 +1 份濃縮洗滌液 )。
3. 用工作洗滌液將待檢血清先按 10 倍稀釋（如 10μl 血清加入90μl 工作洗滌液中，混勻），待檢血清按 25 倍稀釋（如 4μl 血清加入 96μl 工作洗滌液中，混勻），陰、陽性對照不用稀釋。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30min，恢復至室溫。
2.取所需用量酶標板條，設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3. 陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照 50μl；樣品孔每孔
先加入稀釋后的血清樣品 50μl。
然后每孔依次加入 50μl 酶標記物、50ul 抗體工作液。
4. 混勻，蓋好蓋板膜，置 37℃（推薦水浴）避光反應 45 分鐘。
5. 甩去孔內液體，每孔加 350μl 工作洗滌液，靜置 30 秒后棄去，重復洗滌 5 次，最后一次拍干。
6. 每孔依次加底物液 A、底物液 B 各 50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置 37℃避光反應 15 分鐘。
7. 每孔加終止液 50μl，混勻，于 450nm( 可用 630nm 作參比
波長）測定各孔吸光值（A 值）。
【參考值】
實驗正常的情況下，陰性對照吸光值≥1.0，陽性對照吸光值≤陰性對照吸光值 ×50%。
【檢驗結果的判定】
1.PI（阻斷率）=（1-樣本A值/陰性對照平均A值 ）×100%，
PI≥50% 為陽性；PI＜50% 為陰性。
2.本實驗結果為陰性或可疑時表明豬只抗體水平不足，建議補打相應疫苗。
【試驗方法的局限性】
本檢測結果僅供篩查，不作為確診依據。
【注意事項】
1、試劑盒各組份從冷藏環境中取出時，必須平衡至室溫后，方可開封啟用。未使用完的試劑組份應及時放回 2~8℃密封保存。
2、試劑盒請在有效期內使用，拆開的試劑盒盡量在 2 個月內用完，以免拆開后保存不當失效。
3、試劑盒在使用過程中，不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
4、在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會導致洗板不徹底，出現陰性對照不成立等異常情況，所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
5、試劑盒中終止液具有腐蝕性，避免接觸皮膚。
6、本方法僅為篩選方法，不能作為確診依據。
7、試驗過程遇到任何問題，請與廠商聯系。
【儲存及有效期】
于2～8℃避光保存，有效期為12個月。
包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。
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