LOVO/5FU 人結(jié)直腸癌細(xì)胞氟尿嘧啶耐藥株
Fluorouracil resistant human colorectal cancer cell line ,LOVO 5FU
貨號(hào):YJ-0057a(STR(lovo)鑒定)
價(jià)格: 2500.0
規(guī)格: 1*10 6
細(xì)胞介紹
注:本培養(yǎng)基是不直接添加氟尿嘧啶藥物的。
細(xì)胞特性
1) 來(lái)源:結(jié)直腸腺癌
2) 形態(tài):上皮樣 貼壁生長(zhǎng)
3) 含量:>1x10^6 細(xì)胞數(shù)
4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途:僅供科研使用。
運(yùn)輸和保存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理
1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請(qǐng)?jiān)?/span>4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
(1)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
(2)完全培養(yǎng)基的配制:
①準(zhǔn)備F12K(推薦YJ-0007) 培養(yǎng)基:優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%;補(bǔ)充F12K基礎(chǔ)培養(yǎng)基至所需體積。
②準(zhǔn)備F12K含5-Fu完全培養(yǎng)基:優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%;5-Fu:400~10^65uM;補(bǔ)充F12K基礎(chǔ)培養(yǎng)基至所需體積。
(3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
注意:
① 細(xì)胞在傳代和剛復(fù)蘇時(shí)較為脆弱,中止液須為不含5-Fu的完全培養(yǎng)基,且在細(xì)胞未貼壁期間和貼壁前期需用不含5-Fu的完全培養(yǎng)基,待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)穩(wěn)定時(shí)再根據(jù)需要濃度添加5-Fu。
②若細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較為緩慢時(shí),可適當(dāng)降低5-Fu的濃度,或使用不含5-Fu的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較好時(shí),再更換為所需的5-Fu濃度。
二、細(xì)胞培養(yǎng)
(1)細(xì)胞復(fù)蘇
①將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到37℃;
②準(zhǔn)備一支15ml離心管,加入5mL含10%FBS的完全培養(yǎng)基,放入37℃水浴鍋中預(yù)熱;
③戴上護(hù)目鏡,厚毛線手套后,從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞,盡快轉(zhuǎn)入37℃恒溫水浴鍋中復(fù)溫晃動(dòng)凍存管以提高復(fù)溫速率;
④將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中,混勻后,1000rpm離心5min;
⑤準(zhǔn)備一個(gè)T25培養(yǎng)瓶,寫上細(xì)胞名稱、日期,再加入4mL完全培養(yǎng)基;
⑥離心完成后棄去上清,用1mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后,轉(zhuǎn)入T25細(xì)胞培養(yǎng)中,混勻后轉(zhuǎn)入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。
注意:從液氮中取出細(xì)胞凍存管時(shí),若凍存管內(nèi)有液氮進(jìn)入,需擰松凍存管,排出內(nèi)部殘留的液氮,之后擰緊凍存管,置于干冰上,然后放入37℃水浴中,避免溫差太大造成液氮快速氣化而爆炸。
(2)細(xì)胞傳代
①當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到85%以上時(shí),可進(jìn)行傳代;
②在生物安全柜內(nèi),打開培養(yǎng)瓶瓶口,收集瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基;
③向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入3mL無(wú)菌的1×PBS 后,水平放置培養(yǎng)瓶,使PBS能夠浸潤(rùn)到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積,吸棄PBS;
④向瓶?jī)?nèi)加入消化液1mL(0.25%胰蛋白酶),浸潤(rùn)底面后放入37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育3~5min;
⑤孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起,若全部消化下來(lái)則直接向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入2mL含10%FBS的完全培養(yǎng)基中,將懸液吸入15mL離心管;
注意:如還有部分細(xì)胞未消化下來(lái),可采用分步消化:
a. 準(zhǔn)備一個(gè)無(wú)菌的15mL離心管,加入2mL含10%FBS的完全培養(yǎng)基;
b.將消化下來(lái)的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和(避免吹打);
c.向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入1mL 0.25%胰蛋白酶繼續(xù)消化2min左右,輕拍培養(yǎng)瓶,95%左右細(xì)胞脫落后加入2mL含10%FBS的完全培養(yǎng)基中和,中和后的細(xì)胞懸液移入①中的離心管內(nèi)。
⑥1000rpm離心5min;
⑦準(zhǔn)備兩個(gè)新的T25培養(yǎng)瓶,各加入4mL完全培養(yǎng)基;
⑧離心完成后,棄上清,用2mL完全培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞,將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入2個(gè)T25培養(yǎng)瓶,每個(gè)培養(yǎng)瓶各1mL;
⑨水平放置培養(yǎng)瓶,震蕩混勻后將培養(yǎng)瓶置于37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
(3)細(xì)胞凍存 (注意:細(xì)胞凍存建議每瓶T25凍一支)
①~⑥請(qǐng)參照傳代步驟;
⑦離完成后,棄上清,用1mL凍存液重懸細(xì)胞沉淀,然后轉(zhuǎn)入1.8mL凍存管中;
⑧將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中,之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過(guò)夜降溫;
⑨第二天,取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管,盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項(xiàng)
1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐WC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
5.客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,有技術(shù)問(wèn)題可以聯(lián)系咨詢技術(shù)售后,我們隨時(shí)給予解答。
從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤(rùn)色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色十余年,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!
如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):