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Taq DNA Polymerase說明書
點擊次數(shù):1057 更新時間:2022-07-18

Taq DNA Polymerase說明書

 

 

貨號:K0680

保存條件:-20℃保存。

組分說明

 

         Cat. No.                       K0680     K0680E      K0680F

         Kit Size                        500 U      6×500 U     5×2000 U

         Taq DNA Polymerase,  5 U/μl     100 μl     6×100 μl    5×400 μl

         10×Taq PCR Buffer with  Mg2+    2×1 ml      3×5 ml      8×5 ml

                 注意:本產(chǎn)品的10×Taq PCR Buffer中含有15 mM鎂離子。

 

產(chǎn)品簡介

 

  Taq DNA  Polymerase是通過大腸桿菌表達純化的重組酶。其基因來源于Thermus

aquaticus polymerase。該蛋白分子量為94 kDa,具有5′→3DNA聚合酶活性和5′→3′外切核酸酶活性,無3′→5′外切核酸酶活性,擴增得到的PCR產(chǎn)物3′端附有一個“A"堿基,因此可直接用于 T/A克隆。本產(chǎn)品具有延伸速度快、擴增效率高的特點,主要適用于PCR法擴增DNA片段、DNA序列測定等實驗。

活性定義

 

  用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物,在74℃,30分鐘內(nèi),將10 nmol脫氧

核苷酸摻入到酸性不溶物質(zhì)所需的酶量定義為1個活性單位(U)。

 

質(zhì)量控制

 

 經(jīng)過多次柱純化, SDS-PAGE檢測其純度大于99%;經(jīng)檢測無外源核酸酶活性;

PCR方法檢測無宿主殘余DNA;能有效地擴增人基因組中的單拷貝基因;室溫存放一

個月,無明顯活性改變。

 

                本產(chǎn)品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途

 

 

     使用方法

 

     以下舉例為常規(guī)PCR反應體系和反應條件,實際操作中應根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的

     片段大小不同進行相應的改進和優(yōu)化。

 

     1. PCR反應體系

 

 試劑                       50 μl體系              終濃度

10×Taq PCR Buffer with Mg2+          5 μl             1×

dNTP Mix2.5 mM each                    4 μl        200 μM each

Forward Primer10 μM                    2 μl           0.4 μM

Reverse Primer10 μM                    2 μl           0.4 μM

Template DNA                           <1 μg       <1 μg/reaction

Taq DNA Polymerase5 U/μl              0.25 μl

RNase-Free Water                     up to 50 μl

 

        注意:1)引物濃度請以終濃度0.1-1.0 μM作為設定范圍的參考。擴增效率不高的情況下,可提高引物的濃度;發(fā)生非特異性反應時,可降低引物濃度,由此優(yōu)化反應體系。

        2)鎂離子濃度請以終濃度1.5-3 mM作為設定范圍的參考。本產(chǎn)品的10×PCR Buffer中已經(jīng)含有15 mM鎂離子,可根據(jù)不同的引物對和模板來調(diào)節(jié)鎂離子濃度,由此優(yōu)化反應體系。

 

2. PCR反應條件

 

步驟                    溫度                 時間

預變性                    94℃                2 min

變性                    94℃                30 s

退火                 55-65℃               30 s       25-35個循環(huán)

延伸                    72℃                30 s

終延伸                    72℃                2 min

 

注意:1)一般實驗中退火溫度比擴增引物的熔解溫度Tm5℃,無法得到理想的擴增效率時,適當降低退火溫度;發(fā)生非特異性反應時,提高退火溫度,由此優(yōu)化反應條件。

2)延伸時間應根據(jù)所擴增片段大小設定,本產(chǎn)品Taq DNA Polymerase的擴增效率為1 kb/30 s

3)可根據(jù)擴增產(chǎn)物的下游應用設定循環(huán)數(shù)。如果循環(huán)次數(shù)太少,擴增量不足;如果循環(huán)次數(shù)太多,錯配機率會增加,非特異性背景嚴重。所以在保證產(chǎn)物得率的前提下應盡量減少循環(huán)次數(shù)。

3.結(jié)果檢測:反應結(jié)束后取5  µl反應產(chǎn)物,加入適量上樣緩沖液后,進行瓊脂糖凝膠電

       泳檢測。

 

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