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磺胺多殘留檢測試劑盒操作步驟及結(jié)果判定
點(diǎn)擊次數(shù):1363 更新時(shí)間:2022-03-11

磺胺多殘留

快速檢測試劑盒說明書

一、原理

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物磺胺類藥物將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗磺胺類藥物抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物磺胺類藥物的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物磺胺類藥物的含量。

二、試劑盒特性

試劑盒靈敏度:   0.4ppb

孵育溫度:       25

孵育時(shí)間:       30min15min

樣本檢測下限

 織(     法)  ··············· 0.4 ppb

  ················································0.4 ppb

   尿  ··································· 1.6 ppb

     ·········································  8 ppb

交叉反應(yīng)率

磺胺甲基嘧啶(SM1  ·························  100%

磺胺嘧啶(SDSDZ·························  130.2%

磺胺間(六)甲氧嘧啶(SMM················  181.8%

磺胺甲噁唑(SMZ······························  86.6%

磺胺噁唑(SIZ ·······························  76.5%

磺胺噻唑(ST··································  103.3%

磺胺喹噁林(SQX) ····························    59.4%

磺胺甲氧噠嗪(SMP) ····························  68.6%

磺胺氯吡嗪(Esb3)·······························  72.1%

磺胺氯噠嗪(SCPA)······························  49.6%

磺胺對(duì)甲氧嘧啶(SMD·····················  194.8%

磺胺二甲基嘧啶(SM2 ····················   79.3%

磺胺二甲嘧啶(SM2··················   100.6%

磺胺間二甲氧嘧啶(SDM ·················  140.8%

磺胺二甲氧嘧啶(SDM ··············  132.1%

磺胺多辛(SDM2······························  144.7%

酞酰磺噻唑(PST································  73.9%

磺胺苯酰(SML·································  104%

磺胺咪(SG) ········································  0.1%

由反應(yīng)交叉率可以得出:該試劑盒可用于磺胺多種殘留物的檢測,*國家磺胺類多殘留種類檢測的要求。

樣本回收率

   、尿 樣、牛   ···············   85% ±25%

 蜜、血   ···························   80% ±23%

三、試劑盒組成

1

微量測試孔

每條8孔,一板12

2

標(biāo)準(zhǔn)液×6

1ml/瓶)

0ppb

0.4ppb

0.8ppb

1.6ppb

3.2ppb

6.4ppb

3

酶標(biāo)記物

7ml

紅色帽

4

抗體工作液

7ml

藍(lán)色帽

5

底物A

7ml

白色帽

6

底物B

7ml

黑色帽

7

終止液

7ml

黃色帽

8

20X濃縮復(fù)溶液

50ml

透明帽

9

20X濃縮洗滌液

40ml

白色帽

四、所用儀器、試劑

具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)、氮吹儀、刻度移液管

微量移液器:單道 20µl200µl、單道100µl1000µl、多道 30300 µl

      劑:乙酸乙酯、Na2HPO4·12H2O、乙腈、NaH2PO4·2H2OK2HPO4·3H2O二氯甲烷、正己烷

五、樣本前處理步驟

樣本處理前須知

a)實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。

b)實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

樣本前處理需配制:

配液1   0.1M K2HPO4溶液

稱取11.4g  K2HPO4·3H2O用去離子水500ml溶解。

配液2   0.02M PB緩沖液 

稱取5.16g Na2HPO4·12H2O0.87g NaH2PO4·2H2O加去離子水1L溶解。

配液3   乙腈-二氯甲烷混合液

V乙腈-V二氯甲烷  =  1 : 4

配液4   樣本復(fù)溶液:

20X濃縮復(fù)溶液用去離子水119稀釋。

樣本處理:

a)組織高檢測限處理方法一

1、 2.0±0.05g 均質(zhì)過的組織樣本于50ml離心管中;加入8ml乙腈-二氯甲烷混合液,振蕩2min4000r/min以上,15離心10min

2、 4ml清澈有機(jī)相至干燥容器中,50-60氮?dú)饣蚩諝獯蹈桑?/span>

3、 1ml樣本復(fù)溶液溶解干燥的殘留物,加入正己烷1ml。混合30s4000r/min以上15離心5min;去除上層正己烷;

4、 取下層50µl液體用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):  1 

b)組織高檢測限處理方法二

1、 稱取3±0.05g勻漿物置離心管中,先加入3ml 0.02M PB緩沖液充分振蕩混勻,再加入4ml乙酸乙酯和2ml乙腈,充分振蕩10min,于15 4000r/min以上速度離心10min

2、 移取2ml上層液體(約相當(dāng)于1g的樣本)在50-60氮?dú)饣蚩諝獯蹈桑?/span>

3、 加入1ml正己烷溶解干燥的殘留物,再加入1ml樣本復(fù)溶液強(qiáng)烈振蕩1min,室溫4000r/min,離心5min,除去上層正己烷;

4、 取下層50µl液體用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):  1 

c)血清處理方法

1、 將血樣本于室溫放置30min,于104000r/min以上離心10min,分離出血清或過濾血清;

2、 1ml血清,加入3ml 0.02 M PB緩沖液混合,混合30s

3、 50µl液體用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):  4 

d)蜂蜜處理方法

1、 稱取2±0.05g蜂蜜樣本于50ml離心管中,加入2ml 0.1M K2HPO4溶液,渦旋震蕩2min

2、 再加入8ml乙酸乙脂,渦旋振蕩3min4000r/min以上15離心10min

3、 4ml上層液體于56下氮?dú)獯蹈桑?/span>1ml 樣本復(fù)溶液復(fù)溶,渦旋震蕩1min

4、 50µl液體用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):  1 

e)尿液處理方法

1、 3ml0.02 M PB緩沖液與1ml經(jīng)離心后的清亮尿樣本混合,混合30s

2、 50µl液體用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):  4

f)牛奶處理方法

1、 1ml牛奶樣本用0.02 M PB緩沖液按119v/v)稀釋(即20µl牛奶+380µl 0.02 M PB緩沖液),混合30s

2、 50µl液體用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):  20

六、 酶標(biāo)免疫分析程序:

測定前應(yīng)須知:

1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(2025)。

2、 使用之后立即將所有試劑放回28

3、 ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點(diǎn)。

4、 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。

操作步驟:

1、 28冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(2025)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、 取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于2-8

3、 配液:將40ml 20X濃縮洗滌液用去離子水稀釋至800ml

4、 編號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

5、 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品50µl/孔到各自的微孔中,加入酶標(biāo)記物50µl/孔,然后再加入抗體工作液50µl/孔,用蓋板膜封板,25環(huán)境中反應(yīng)30min

6、 將孔內(nèi)液體甩干,用已稀釋的洗滌液250µl/孔洗板45次,每次間隔1530秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

7、 顯色:加入底物A50µl/孔,再加入底物B50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25環(huán)境中避光顯色15min

8、 測定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,5min內(nèi)讀數(shù)),測定每孔OD值。

七、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含磺胺類藥物量成負(fù)相關(guān)。

1、粗略判定:

用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb2.243 0.4ppb1.8160.8ppb1.4151.6ppb0.743.2ppb0.3136.4ppb0.155。則樣本1的濃度范圍是3.2ppb6.4ppb;樣本2的濃度范圍是0.8ppb1.6ppb,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中磺胺類藥物實(shí)際濃度。

2、定量分析

1)百分吸光率的計(jì)算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即

百分吸光度值(%)=

B

×100%

B0

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)品濃ng/ml)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中磺胺類藥物實(shí)際濃度。

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(歡迎來電索取)

3、單項(xiàng)磺胺類檢測結(jié)果計(jì)算

    將按照試劑盒計(jì)算出來的結(jié)果乘以相應(yīng)的交叉反應(yīng)率即為磺胺單項(xiàng)的檢測值。

八、 注意事項(xiàng)

1、 室溫低于25或試劑及標(biāo)本未回到室溫(2025)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

2、 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

3、 混合要均勻,否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

4、 反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。

5、 不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。

6、 不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對(duì)光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。

7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品1的吸光度值小于0.5時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。

8、 該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

九、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期

1、 儲(chǔ)藏條件:試劑盒于28保存,不要冷凍。

2、  質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請(qǐng)放心使用。

 

2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤色,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

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