博來霉素(Bleomycin)與鐵的復(fù)合物嵌入DNA,引起DNA單鏈和雙鏈斷裂。不引起RNA鏈斷裂。作用的第一步是本品的二噻唑環(huán)嵌入DNA的G-C堿基對(duì)之間,同時(shí)末端三肽氨基酸的正電荷和DNA磷酸基作用,使其解鏈。作用的第二步是本品與鐵的復(fù)合物導(dǎo)致超氧或羥自由基的生成,引起DNA鏈斷裂。口服無效,需經(jīng)肌內(nèi)或靜脈注射。
博萊霉素應(yīng)用領(lǐng)域:
可選擇Sh ble基因表達(dá)的細(xì)胞。與現(xiàn)在使用的其他動(dòng)物細(xì)胞標(biāo)記物無交叉抗性
因此這種抗生素可用來分離對(duì)其他篩選劑(如:慶大霉素,潮霉素)有抗性的克隆。Zeocin是一種屬于爭(zhēng)光霉素家族的糖蛋白抗生素,在體內(nèi)能作用于大多數(shù)細(xì)菌(包括E. coli)、真菌(如:酵母菌)、植物細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞。
博萊霉素溶液的配制方法:
1. 先將使用到的所有器具高溫滅菌,儀器表面、工作臺(tái)面消毒。
2. 在分析天平上稱取博萊霉素粉末0.500 g,加10 mL無菌水溶液溶解。
3. 用0.2微米濾膜過濾除菌到無菌容器中,然后分裝到 1.5 mL EP管中。
不建議使用螺旋蓋管子,容易污染。-20度保存。
為避免污染和反復(fù)凍融,建議分裝成小規(guī)格的,如500 uL。
博萊霉素使用辦法:
1、液體Zeocin可用于細(xì)胞培養(yǎng)。
2、用于篩選轉(zhuǎn)化株的Zeocin濃度根據(jù)PH值和鹽濃度改變。
3、PH越高,鹽濃度越低Zeocin活性越大。
4、普通大腸桿菌菌株篩選可在25 ?g/ml zeocin濃度的低鹽LB瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行,PH調(diào)至7.5 。
5、動(dòng)物細(xì)胞篩選:根據(jù)不同細(xì)胞系從100 到 750 ?g/ml 。
6、植物細(xì)胞篩選:根據(jù)不同的細(xì)胞種類和培養(yǎng)基從50 到 250 ?g/ml 。