人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞(NK-92)
細(xì)胞介紹
NK-92是從一位患有急進(jìn)性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細(xì)胞衍生來(lái)的一株白細(xì)胞介素-2依賴型NK細(xì)胞株。這株細(xì)胞對(duì)很多惡性細(xì)胞有細(xì)胞毒性;鉻釋放試驗(yàn)顯示它能殺死K562和Daudi細(xì)胞。NK-92細(xì)胞(經(jīng)過(guò)照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的體外免疫清掃而不危及血細(xì)胞的功能。NK-92細(xì)胞有以下特征: CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54表面標(biāo)記陽(yáng)性,CD56亮;CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20, CD23, CD34和HLA-DR表面標(biāo)記陰性。
細(xì)胞特性
1) 來(lái)源:惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞
2) 形態(tài):淋巴母細(xì)胞
3) 含量:>1x106 個(gè)/mL
4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5) 規(guī)格:T75瓶或者1mL凍存管包裝
運(yùn)輸和保存:使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后,可在1000RPM,常溫條件下,離心5min后,于潔凈操作臺(tái)棄去上清,加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
細(xì)胞用途:僅供科研使用。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),75%;添加0.2mM肌醇,0.1mM β-Me,0.02mM葉酸,100U IL-2,馬血清12.5%,優(yōu)質(zhì)胎牛血清,12.5%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或將細(xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
注意事項(xiàng):
1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):
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