口腔/咽拭子基因組 DNA 快速提取試劑盒
Rapid Swab DNA Kit
產(chǎn)品信息:
保存條件:本試劑盒在室溫儲(chǔ)存 12 個(gè)月不影響使用效果. 蛋白酶 K 可室溫運(yùn)輸,建議
-20℃長(zhǎng)期保存。
產(chǎn)品介紹:
本試劑盒采用特制的進(jìn)口 DNA 吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng),特別適合于從口腔
咽拭子中分離純化基因組 DNA。各種來(lái)源樣品裂解消化處理后 DNA 在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜(特別配備了 Carrier RNA 可以從體系中輕松捕獲微量核酸),再通過(guò)一系列快速的漂洗-離心的步驟,將鹽、細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,后低鹽的洗脫緩沖液將純凈的基因組 DNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。純化后的 DNA 無(wú)雜質(zhì)和 PCR 抑制劑,可直接適用于 PCR 分析。
產(chǎn)品特點(diǎn):
配備了 Carrier RNA 用于充分收集特別微量DNA。
提取的 DNA 純度高,質(zhì)量穩(wěn)定可靠,可適用于各種常規(guī)操作,包括 PCR、酶切、測(cè)
序、Southern 雜交等。
注意事項(xiàng):
1. 結(jié)合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀,可以在 37℃水浴幾分
鐘幫助重新溶解,恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。
2. 避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中發(fā)生揮發(fā)、氧化、pH 值變化。
3. Carrier RNA
1) Carrier RNA 使用方法:如果起始處理量很少(口腔咽拭子上收集到的細(xì)胞很少),我們推薦使用 Carrier RNA,如果預(yù)期有較大量 DNA 產(chǎn)量,用戶可以根據(jù)需要選擇是否加入 Carrier RNA。使用時(shí)每個(gè)樣品提取所需結(jié)合液 CB 中加入 1μl Carrier RNA 儲(chǔ)存溶液,將結(jié)合液 CB 與 Carrier RNA 溶液充分顛倒混勻即可(結(jié)合液 CB 容易起泡沫,請(qǐng)勿使用渦旋振蕩混勻)。也可根據(jù)樣品數(shù)量,在總共需要的結(jié)合液CB 中加入總共需要的 Carrier RNA 混勻備用?;旌弦涸谑覝?24 小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
Carrier RNA 加入過(guò)多造成 DNA 洗脫液中 Carrier RNA 濃度過(guò)高,下游 PCR 反應(yīng)可能受干擾,加入過(guò)少可能并不能幫助提高 DNA 產(chǎn)量和 PCR 敏感度,因此加入量應(yīng)該在具體試驗(yàn)中調(diào)整以得到j(luò)ia效果。
自備試劑:無(wú)水乙醇操作步驟:
提示:第--次使用前請(qǐng)先在 15ml 漂洗液 WB 中加入 60ml 無(wú)水乙醇,充分混勻,
加入后請(qǐng)及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇,以免多次加入!
取樣:取一根醫(yī)用消毒棉簽(手不要碰觸脫脂棉部位),伸進(jìn)口腔,緊靠臉頰內(nèi)側(cè)來(lái)回刮拭 20 次(不時(shí)旋轉(zhuǎn)棉棒),需充分接觸口腔粘膜。
注意事項(xiàng):避免用手觸及棉簽,采集前可先用清水輕輕漱口。為防止樣本被食物或者飲料污染,取樣前 30 min 內(nèi)應(yīng)該避免進(jìn)食或者飲水。
1. 用剪刀將棉簽部分從其桿上剪下,放入 2ml 離心管中,加入 400μl 裂解液 ML。
2. 再加入 20μl 的蛋白酶 K (20mg/ml)溶液,立刻渦旋振蕩充分混勻,56℃放置 30 min, 期間每 10 min 渦旋混勻 10 sec。
3. 加入 400μl 結(jié)合液 CB,立刻渦旋振蕩充分混勻,70℃放置 10 min(擠壓去除拭子, 將盡可能多的裂解液轉(zhuǎn)移至新的離心管中)。
如果拭子上細(xì)胞數(shù)量少,導(dǎo)致提取的基因組 DNA 產(chǎn)量過(guò)低, 可以在 400μl 結(jié)合液 CB
中加入 1μl Carrier RNA 儲(chǔ)存溶液。
4. 冷卻后加 200μl 無(wú)水乙醇,立刻渦旋振蕩充分混勻。簡(jiǎn)短離心以除去管蓋內(nèi)壁的液滴,收集所有的液體到管底。(如果周圍環(huán)境高于 25℃,乙醇需要冰上預(yù)冷后再加入)
5. 將上一步混合物中加入一個(gè)吸附柱 AC 中(吸附柱放入收集管中),12,000rpm 離心
30-60 sec,倒掉收集管中的廢液。
6. 加入 500μl 抑制物去除液 IR,12,000rpm 離心 30 sec,棄廢液。
7. 加入 500μl 漂洗液 WB(請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇!),12,000rpm 離心 30 sec,棄掉廢液。
8. 重復(fù)操作步驟 7。
9. 將吸附柱 AC 放回空收集管中,12,000rpm 離心 2 min,將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘,以*晾干吸附材料中殘余的漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
10. 取出吸附柱AC,放入一個(gè)干凈的離心管中,在吸附膜的中間部位加 20-50μl 洗脫緩沖液 EB (洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中預(yù)熱效果更好), 室溫放置 1 min,
12,000rpm 離心 1 min。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,室溫放置 1 min,
12,000rpm 離心 1 min。
洗脫體積越大,洗脫效率越高,如果需要DNA 濃度較高,可以適當(dāng)減少洗脫體積, 但是小體積不應(yīng)少于 20μl,體積過(guò)小降低 DNA 洗脫效率,減少 DNA 產(chǎn)量。(注意:DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防 DNA 降解)
DNA 濃度及純度檢測(cè)
得到的基因組DNA** 片段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過(guò)程中的剪切力等因素有關(guān)?;厥?得到的DNA **片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。
DNA 應(yīng)在 OD260 處有顯著吸收峰,OD260 值為 1 相當(dāng)于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA、
40μg/ml 單鏈 DNA。OD260/OD280 比值應(yīng)為 1.7-1.9,如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液,而使用滅菌水比值會(huì)偏低,因?yàn)?pH 值和離子存在會(huì)影響光吸收值,但并不表示純度低。
本產(chǎn)品僅供科研不用于臨床診斷
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):
|