Super-Bradford 蛋白定量試劑盒說明書
Super-BradfordProteinAssayKit
Super-Bradford 蛋白定量試劑盒說明書
Cat.No. K0013
保存:2-8℃
組分說明
Catalogno. K0013
KitSize 800 次/微孔,100 次/試管
BradfordProteinAssayReagent 200ml
BSA 標準液(2mg/ml) 2ml
產品簡介
Bradford 法是簡單和快速的比色蛋白定量方法。這一方法基于考馬斯亮藍 G-250 與蛋白質結合后,產生藍色化合物,反應迅速而穩(wěn)定。反應化合物在 465-595nm 處有大的光吸收值,化合物顏色的深淺與蛋白濃度的高低成正比關系,因此可通過檢測 595nm 的光吸收值的大小來計算蛋白的含量。本產品將傳統(tǒng)的 Bradford 方法進行了改良,大限度的加大蛋白定量的線性范圍,變異性小于普通考馬斯亮藍染色法,靈敏度范圍為 100-1,500 μg/ml。使用本產品反應迅速,顏色產物 1 小時內保持穩(wěn)定。本試劑盒適用于多種緩沖液系統(tǒng),不受金屬離子、還原劑和螯合劑的干擾。
注意事項
1. 如待測樣品中含較多的干擾物質(具體見附表 1),可采用 BCA 蛋白定量試劑盒(K0014)或其他蛋白定量產品。
2. BSA 標準品的稀釋液需與待測樣品的稀釋液一致(可用 1×PBS 或 0.9%生理鹽水進行稀釋)。
3. 本試劑盒不適合含有去污劑的蛋白定量,所測蛋白分子量必須大于 3kD。
4. 操作中請佩戴手套。
5. 本產品僅限科研使用。
操作步驟(以大腸桿菌表達系統(tǒng)為例)
1. 稀釋 BSA 標準品:用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋 BSA 標準品。
管號 稀釋液用量(μl) BSA標準品用量(μl) BSA標準品終濃度(μg/ml)
A 0 100 2,000
B 50 150 1,500
C 200 200 1,000
D 200 200(從C管中取) 500
E 200 200(從D管中取) 250
F 200 200(從E管中取) 125
G 200 0 0(空白)
2. 試管檢測(檢測范圍:100-1500 μg/ml)
1)按上表稀釋標準品,將 30 μl 稀釋好的 BSA 標準品分別加到作好標記的試管中。
2)取干凈的試管,分別加入 30 μl 待測蛋白樣品(原液或稀釋液),并作好標記,推薦每個測定做 2-3 個平行反應。
3)向步驟 1)和步驟 2)的試管中各加入 1.5mlBradfordProteinAssayReagent,充分混勻,室溫放置 10 分鐘。
4)用分光光度計測定 595nm 處的吸光值。
5)繪制標準曲線,計算樣品中的蛋白濃度。
注意:數(shù)據(jù)處理時需要去除明顯錯誤的值。未知樣品濃度可以從標準曲線中查得, 實際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。如果是計算機繪制得曲線,可以從計算機給出的線性方程式計算出未知樣品的濃度。
6)如果所得到的蛋白濃度不在檢測范圍內,請重新稀釋樣品后再次測定。
3. 微孔檢測(檢測范圍:100-1500 μg/ml)
1)將按表 1 稀釋好的 A-GBSA 標準品和待測蛋白樣品(原液或稀釋液)各 5 μl 分別加到作好標記的 96 孔板微孔中。
2)每孔加入 250 μlBradfordProteinAssayReagent,充分混勻,蓋上 96 孔板蓋,室溫放置 10 分鐘。
4)用酶標儀測定 595nm 處的吸光值。
5)繪制標準曲線,計算樣品中的蛋白濃度。
注意:數(shù)據(jù)處理時需要去除明顯錯誤的值。未知樣品濃度可以從標準曲線中查得, 實際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。如果是計算機繪制得曲線,可以從計算機給出的線性方程式計算出未知樣品的濃度。
6)如果所得到的蛋白濃度不在檢測范圍內,請重新稀釋樣品后再次測定。
實驗代做服務:
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