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青霉素快速檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
點(diǎn)擊次數(shù):1943 更新時(shí)間:2020-08-11

青霉素

快速檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

一、原理

本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物青霉素將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗青霉素抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物青霉素的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物青霉素的含量。

二、試劑盒特性

  • 試劑盒靈敏度:   0.1ppb
  • 孵育溫度:       25
  • 孵育時(shí)間:       30min30min15min
  • 樣本檢測(cè)下限

組織、蜂蜜、牛奶 ································  2ppb

蜂蜜、牛奶樣本因存在一定的干擾,定量檢測(cè)下限為4ppb

  • 交叉反應(yīng)率

青霉素·   ········································  100%

氨芐青霉素········································  0.8%

鄰氯青霉素 ·······································  0.2%

雙氯青霉素 ·······································  0.1%

阿莫西林  ·········································  0.1%

頭孢塞呋  ·········································  0.1%

  • 樣本回收率

   ·········································  75±19%

蜂蜜 、牛奶 ··································  70±17%

三、試劑盒組成

1

微量測(cè)試孔

每條8孔,一板12條

2

標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶

(1ml/瓶)

0ppb

0.1ppb

0.3ppb

0.9ppb

2.7ppb

8.1ppb

3

酶標(biāo)記物

12ml

紅色帽

4

抗體工作液

7ml

藍(lán)色帽

5

底物A液

7ml

白色帽

6

底物B液

7ml

黑色帽

7

終止液

7ml

黃色帽

8

20X濃縮洗滌液

40ml

白色帽

9

5X濃縮復(fù)溶液

50ml

透明帽

四、所用儀器、試劑

具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)、氮吹儀、恒溫箱

微量移液器:?jiǎn)蔚?/span> 20200µl、單道1001000µl、多道 30300 µl

      劑:氫氧化鈉乙腈正己烷亞硝基鐵氰*鈉硫酸鋅

五、樣本前處理步驟

  • 樣本處理前須知

a)實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。

b)實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

  • 樣本前處理需配制:

配液1   C(牛奶、奶粉樣本):

 10.7g 亞硝基鐵氰化*加去離子水100ml溶解。

配液2   D(牛奶、奶粉樣本): 

28.8g硫酸鋅加去離子水100ml溶解。

配液3  0.1M NaOH溶液

0.4gNaOH加去離子水100ml溶解

配液4  乙腈-0.1M NaOH溶液

84ml乙腈16ml 0.1M NaOH混合均勻

配液5  樣本復(fù)溶液:

5X濃縮復(fù)溶液用去離子水按14稀釋。

配液6  1M NaOH溶液

        4g NaOH加去離子水100ml溶解

  • 樣本處理:

a)組織(雞、鴨、豬肉/豬肝、蝦、魚(yú))樣本處理方法

  • 稱取2±0.05g均質(zhì)后樣本于50ml離心管中,加入2ml 1M NaOH溶液,渦旋2min,再加入8ml乙腈振蕩5min,室溫4000r/min以上離心10min
  • 取出1ml上清液,在56℃條件下氮?dú)饣蚩諝饬鞔抵?干燥;
  • 加入1 ml樣本復(fù)溶液溶解干燥殘留物,混合30s;將溶解后的樣本液按1350µl樣本液加150µl樣本復(fù)溶液)稀釋,混合30s
  • 50 µl用于分析

樣本稀釋倍數(shù):  20

b)蜂蜜處理方法

  • 準(zhǔn)確稱取1±0.05g蜂蜜樣本于離心管中,加入3ml 樣本復(fù)溶液,振蕩混勻后靜置20min;室溫4000r/min 以上離心10min
  • 取上層液體用樣本復(fù)溶液按1420µl樣本液+80µl稀釋后的復(fù)溶液)稀釋,混合30s
  • 50µl用于分析

樣本稀釋倍數(shù):  20 

c 牛奶樣本處理方法一

  • 2ml鮮牛奶于5ml離心管,加入50µlC混勻;
  • 加入50 µl D振蕩1min10 4000r/min以上離心10min
  • 取上層清亮液體用樣本復(fù)溶液按1 1920µl樣本液+380µl樣本復(fù)溶液)稀釋,混合30s
  • 50µl用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):20

注:如果離心后仍然渾濁,再重復(fù)沉淀過(guò)程

d)牛奶樣本處理方法二

  • 2ml去除脂肪奶樣至離心管中;
  • 加入8ml乙腈-0.1M NaOH充分振蕩2min15 4000r/min以上離心10min,取1ml上清液,在56℃條件下氮?dú)饣蚩諝饬鞔抵?干燥;
  • 1ml正己烷溶解干燥的殘留物后,再加入1ml樣本復(fù)溶液混合30s,離心去除正己烷相;
  • 取下層相用樣本復(fù)溶液按13 50µl樣本液加150µl稀釋后的復(fù)溶液)稀釋,混合30s
  • 50µl用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):  20 

六、 酶標(biāo)免疫分析程序:

  • 測(cè)定前應(yīng)須知:
  • 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(2025)。
  • 使用之后立即將所有試劑放回28
  • ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。
  • 所有恒溫孵育過(guò)程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。
  • 操作步驟:
  • 28冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(2025)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
  • 取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于2-8
  • 配液:將40ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照1:19稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按所需用量配制洗滌液
  • 編號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
  • 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加加入抗體工作液50µl/孔,用蓋板膜封板,輕輕振蕩混勻。25環(huán)境中反應(yīng)30min
  • 將孔內(nèi)液體甩干,用已稀釋的洗滌液250µl/孔洗板45次,每次間隔1530秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
  • 每孔加入酶標(biāo)記物100µl,蓋板膜蓋板后置25℃環(huán)境中反應(yīng)30min。將孔內(nèi)液體甩干,用洗滌液充分洗,45遍(同上),用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
  • 顯色:加入底物A50µl/孔,再加入底物B50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25環(huán)境中避光顯色15min
  • 測(cè)定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè),5min內(nèi)讀數(shù)),測(cè)定每孔OD值。

七、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含青霉素量成負(fù)相關(guān)。

1、粗略判定:

用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb2.243 0.1ppb1.8160.3ppb1.4150.9ppb0.742.7ppb0.3138.1ppb0.155。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb8.1ppb;樣本2的濃度范圍是0.3ppb0.9ppb,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中青霉素實(shí)際濃度。

2、定量分析

1)百分吸光率的計(jì)算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第)—個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即

百分吸光%)=

B

×100%

B0

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以青霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃ng/ml)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中青霉素實(shí)際濃度。

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。

八、 注意事項(xiàng)

  • 室溫低于25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫(2025℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
  • 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
  • 混合要均勻,否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
  • 反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
  • 不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。
  • 不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
  • 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品1的吸光度值小于0.5時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。
  • 該試劑盒*jia反應(yīng)溫度為25℃,溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

九、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期

  • 儲(chǔ)藏條件:試劑盒于2-8保存,不要冷凍。
  •  質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。

提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請(qǐng)放心使用。

 

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

 

WB代做

HE染色

免疫熒光染色

蛋白相互作用分析

ELISA免費(fèi)代檢測(cè)

免疫組化

熒光定量PCR

番紅O固綠染色

流式細(xì)胞檢測(cè)

激光共聚焦

透射電鏡服務(wù)

DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

免疫共沉淀(Co-IP)

DNA甲基化

掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

microRNA 測(cè)序

半定量RT-PCR

分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

原位雜交(FIsh)

石蠟/冰凍切片

RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP

CCK8檢測(cè)

蛋白雙向(2-D)電泳

蛋白雙向2D-WB

ATP/ADP檢測(cè)

Taqman探針

細(xì)胞劃痕

基因組DNA提取

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001678號(hào)

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