貨號:YX-C-A604 規格:50管/48樣
苯丙氨酸解氨酶試劑盒說明書
紫外分光光度法
產品簡介:
PAL(EC4. 3 1 5)廣泛存在于各種植物和少數微生物中,是植物體內苯丙烷類代謝的關鍵酶,與一些重要的次生物質如木質素、異黃酮類植保素、黃酮類色素等合成密切相關,在植物正常生長發育和抵御病菌侵害過程中起重要作用。PAL催化L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸和氨,反式肉桂酸在290nm處有大吸收值,通過測定吸光值升高速率計算PAL活性。
試驗中所需的儀器和試劑:
紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1ml比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
產品內容:
提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體40mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×3瓶,4℃保存,臨用前每瓶加入4mL雙蒸水充分溶解待用;現配現用。
試劑三:液體2.5mL×1瓶,4℃保存;
操作步驟:
一、粗酶液提取:
稱取約0.1g組織,加入1mL提取液進行冰浴勻漿。10000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
二、測定操作表:
試劑名稱 | 測定管(μL) | 對照管(μL) |
樣本 | 20 |
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試劑一 | 780 | 800 |
試劑二 | 200 | 200 |
混勻,30℃準確水浴30min | ||
試劑三 | 40 | 40 |
混勻,靜置10min后,用對照管調零,290nm處記錄測定管吸光值A (A=A測定管-A對照管)。
PAL活性計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白在每ml反應體系中每分鐘使290nm下吸光值變化0.1定義為一個酶活力單位。
PAL(U/mg prot)=A×反應總體積(1040μL)÷樣本體積(20μL)÷反應時間(30min)÷0.1 ÷蛋白濃度(mg/mL)=17.3×A ÷蛋白濃度(mg/mL)
(2)按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織在每ml反應體系中每分鐘使290nm下吸光值變化0.1定義為一個酶活力單位。
PAL(U/g 鮮重)=A×反應總體積(1040μL)÷﹝樣本鮮重(g)×樣本體積(20μL)÷V樣總(1mL)﹞÷反應時間(30min)÷0.1 =17.3×A ÷樣本鮮重(g)
實驗代做服務:
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