非洲綠猴腎細胞(Vero)
細胞介紹
Vero細胞株是日本千葉大學的Y. Yasumura和Y. Kawakita從正常成年非洲綠猴的腎臟建株的。1964年6月15日B. Simizu將其從千葉大學帶到國立健康研究所(NIH)國立過敏及傳染病研究所熱帶病毒實驗室時,已傳至第93代。
細胞特性
1) 來源:非洲綠猴正常腎
2) 形態:上皮細胞樣,貼壁生長
3) 含量:>1x106
4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存:可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式:(1)干冰運輸,收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇;(2)存活細胞,收到后應繼續生長,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
收到細胞后請拍照,3天內如果發現污染,請及時拍照與我們聯系。
細胞用途:僅供科研使用。
細胞接收后的處理:
1) 收到細胞后,請檢查發貨培養瓶的狀況,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。
2) 在顯微鏡下確認細胞生長狀態時,hao在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X和20×物鏡下,同時給剛收到的細胞拍照,(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態的依據。
3) 觀察好細胞狀態后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h。
4) 貼壁細胞:在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現象,如發現貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長,可將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基的原培養瓶中(或新的培養瓶中)。
5) 懸浮細胞:T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中(加入按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基)。
6)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。 收到細胞后di一次傳代建議1:2傳代 。
細胞培養步驟
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備MEM(推薦iCell-0012)培養基;優質胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
注:di一次傳代推薦傳代比例為1:2,以后傳代比例可根據客戶需要自己決定。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。
下面T25瓶為類;
1,細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入1ml含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2,4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,根據細胞數量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存1ml細胞懸液,注意凍存管做好標識。
3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項:
1. 收到細胞后,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
實驗代做服務:
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