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BCA法蛋白含量測定試劑盒說明書
點擊次數:2834 更新時間:2020-03-13

BCA法蛋白含量測定試劑盒說明書 

微量法

注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定,確保蛋白濃度在20-2000μg/ml內。

貨號YX-W-C202

規格100T/96S

產品內容

試劑A:液體×1瓶,4℃保存。 

試劑B:液體×1支,4℃保存。 

標準品:液體×1支,4℃保存。 

產品說明

樣品可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外,可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分析。 測定原理: 堿性條件下,蛋白質中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵,能將Cu2+還原成Cu+2分子的BCACu+結合,生成紫色絡合物,在540-595nm有吸收峰,562nm處吸收峰ZUI強。 自備儀器和用品: 

臺式離心機、恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸餾水。 

工作液配制:臨用前請根據擬用工作液體積(樣本數×0.2mL),將試劑AB按照501的比例混合,蓋緊后充分混勻。 

操作步驟:

一、樣品中可溶性蛋白質提取: 

1. 液體樣品:澄清液體樣品可以直接測定。 

2. 組織樣品:按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液(自備,根據需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水)冰浴勻漿,10000rpm4℃離心10min,取上清,即待測液。(動物樣品常常需要稀釋) 

3. 細菌、真菌:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000rpm4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。 

 

二、測定操作: 

1. 可見分光光度計/酶標儀預熱30min,調節波長到562 nm,蒸餾水調零。

  • 工作液置于60℃水浴預熱30 min

 

 空白管 

標準管 

測定管 

蒸餾水(μL 

4

 

 

標準品(μL 

 

4

 

待測液(μL 

 

 

4

工作液(μL 

200

200

200

混勻后置于60℃保溫30min,于微量玻璃比色皿/96孔板,于562nm處測定吸光值A,分別記為A空白管、A標準管、A測定管。

注意:空白管和標準管只需要做一次。 

三、計算公式: 

Cpr (mg/mL)= C標準品×A測定管-A空白管)÷A標準管-A空白管) 

=0.5×A測定管-A空白管)÷A標準管-A空白管)

注意事項:

  • BCA 法蛋白含量測定試劑盒,適用于測定蛋白濃度在20-2000μg/ml 樣品。測定前取1-2 個樣做預實驗,樣品蛋白含量太高的話,請稀釋至相應濃度范圍內,以確保測定的準確性。 
  • 待測樣品蛋白提取可用生理鹽水、蒸餾水或PBS 提取。 
  • 由于受測定溫度及時間等的影響,請嚴格按照給定條件測定。

 

 

本產品僅供科學研究使用!請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途!

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滬公網安備 31011802001678號

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