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姬姆薩染色液說明書
點擊次數(shù):2179 更新時間:2019-01-03

染色液(Giemsa Stain,1:9)

 

色素(又稱吉姆色素)是由天青混合而成。Giemsa 染色原理和結(jié)瑞氏染色基本相同,染色液漿著色力較強,能好的示胞漿的嗜堿性程度,特血液和骨髓胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜堿性粒,著色清晰,但是胞核著色偏深, 結(jié)構(gòu)佳,故染液常瑞氏染液聯(lián)合使用。Giemsa Stain 口的色素、甲醇主要原料,含*經(jīng)研磨配制而成,能呈現(xiàn)出清晰胞染色效果,經(jīng)常用于組織切片、血液和胞涂片、菌、染色體顯帶、原生物寄生蟲等染色。嗜酸性堿性蛋白質(zhì)酸性染料伊紅結(jié)合,染粉色,稱嗜酸性物質(zhì)胞核蛋白和淋巴胞胞漿為酸性,堿性染料美或天青結(jié)合,染紫色,稱嗜堿性物質(zhì);中性粒呈等態(tài)和美均可結(jié)合,染淡紫色,稱中性物質(zhì)

 Giemsa Stain(1:9)10×存液和磷酸鹽緩沖液成,1:9  混合成工作液后

使用;亦可以分使用,即先用 Giemsa Stain 染色,再經(jīng)磷酸鹽緩沖液理,亦可以得到

滿意的染色效果。

 

產(chǎn)成:                                                     100ml          500ml              

試劑(A): Giemsa Stain 存液(10×)         10ml             50ml       RT 避 光

試劑(B): 磷酸鹽緩沖液                                  100ml           500ml    RT

                                                      

材料:

1玻片、

2

3甲醇

40.10.5%乙酸

操作步驟(供參考)

(一)一法涂片染色

1Giemsa 工作液的配制:

試劑(A):試劑(B)=1:9 混合,即取1Giemsa Stain 存液(10×)加入到9份的磷酸鹽緩沖液中充分混勻,即Giemsa 工作液,即用型試劑易保存,即用即配。

2、常規(guī)方法制血液涂片或骨髓涂片,待涂片自然干燥后,用甲醇固定 13min

3、將血液涂片或骨髓涂片置于染色架上,滴加 Giemsa 工作液覆蓋涂片,室溫滴染 1530min

4、用自來水或蒸慢從玻片一端沖洗。

5、干燥、鏡檢

染色結(jié)果:

嗜酸性粒        粉

嗜堿性粒        紫

中性粒          淡紫色

(二)兩法涂片染色

1Giemsa 工作液的配制:

試劑(A):=1:4 混合,即取1 份的Giemsa Stain存液(10×)加入到4 份的蒸水中充分混勻,即Giemsa 工作液。Giemsa工作液即用型試劑易保存,即用即配。

2、常規(guī)方法制血液涂片或骨髓涂片,待涂片自然干燥后,用甲醇固定 13min

3、將血液涂片或骨髓涂片置于染色架上,滴加適量 Giemsa 工作液覆蓋涂片,室溫滴染1015min

4、加入等量磷酸鹽緩沖液,輕輕動載玻片,室溫靜置510min

5、用自來水或蒸慢從玻片一端沖洗。

6、干燥、鏡檢

染色結(jié)果:

嗜酸性粒         粉

嗜堿性粒         紫

中性粒           淡紫色

(三)組織切片染色

1Giemsa 工作液的配制:

試劑(A):試劑(B) =1:9 混合,即取1Giemsa Stain 存液(10×)加入到9份磷酸鹽緩沖液中充分混勻,即Giemsa 工作液。Giemsa 工作液即用型試劑易保存,即用即配。

2、新鮮組織立即置于Regaud 固定液固定2天,期間應(yīng)1次固定液。

33%固定1天。

4、流水沖洗16個小夜。

5、照常規(guī)脫水、包埋。

6、切片厚度約為5μm,常規(guī)脫蠟至水。

7、蒸水清洗2次,1min

8、入含Giemsa 工作液染缸,浸染1824h

9、蒸水稍微清洗。

100.10.5%乙酸洗12min

11、自來水稍沖洗。

12、用無水乙醇迅速脫水3次,510s

13、二甲苯透明,中性脂封固。

染色結(jié)果:

胞核               色至紫色

質(zhì)               

鉻細胞胞質(zhì)        

結(jié)締組織            

 

注意事

1、血液涂片或骨髓涂片應(yīng)厚薄均勻,以免影響染色效果。

2、涂片染色中Giemsa 染色后,勿先去除染液或直接涂片用力沖洗。

3、如果染色深或淺,應(yīng)調(diào)整染色時間或工作液度。

4、涂片染色和組織切片染色中,pH值對染色有一定影響,玻片應(yīng)、無酸堿染,以免影響染色效果。

5、染色液經(jīng)后液面應(yīng)金屬光澤則表示染液有染色作用,否染色液可能失效。

6組織切片染色中,染色后需用大量0.10.5%乙酸急速沖洗,避免浮面沉淀物染切片后以洗脫。

70.5%乙酸分化常用于Giemsa 組織切片染色,如有必要亦可用于胞涂片,但其應(yīng)適量下調(diào)0.5%乙酸分化切片,切片呈粉色即可止。

8Giemsa 組織切片染色中,無水乙醇脫水要迅速,否切片易褪色。

9、涂片染色和組織切片染色中,如需急速結(jié)果,可按Giemsa  Stain存液(10×):磷酸鹽緩沖液=1:1 配制 Giemsa 工作液,充分混勻,即快速Giemsa染色工作液,將染色液滴加于胞涂片或組織切片上,加染色,2030s后重新加染色液,反510 次,其余步驟同上。

10、染色液可重使用,但能多次重,若有沉淀物應(yīng)過濾后使用。

11Regaud 固定液: 3%:=4:1 配制,用前混勻,12 天后失效。

有效期:24 個月有效。

 

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